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qianyuyan

铜虫 (小有名气)

[交流] 重组质粒筛选

我做Race后的产物隔了一天才做回收的,回收后就做T-A连接转化了,长出白色菌落。可是用巢式引物,通过菌落PCR来验证时,就是得不到我所需要的重组质粒。但是胶回收产物用巢式引物做PCR时,是有我所需要的条带。
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liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德


qianyuyan(金币+1):谢谢参与
不是很懂,帮顶
有梦就有力量,有心就会成功!
2楼2009-08-08 13:39:10
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huanshi

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
qianyuyan(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-8 13:56
长出的白色菌落多吗??

有部分白色菌落可能并非重组质粒,有可能你的X-gal涂的不均匀,有些地方就没有X-gal,出现假阳性。。

另外,你胶回收产物的纯度怎么样??
3楼2009-08-08 13:46:43
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hong303030

金虫 (小有名气)


qianyuyan(金币+1):谢谢参与
白色菌落可能是假阳性
4楼2009-08-08 14:06:28
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司马诸葛

木虫 (正式写手)


qianyuyan(金币+1):谢谢参与
帮顶
5楼2009-08-08 14:39:58
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qianyuyan(金币+1):谢谢参与
6楼2009-08-08 16:58:40
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695

木虫 (职业作家)

多挑几个白色菌落试试,不过有时候这个蓝白斑还是不够准确,也可能是我们技术不到家吧
7楼2009-08-08 17:58:46
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jpeng6118


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也遇到相似的问题了,帮顶~
8楼2009-08-08 18:05:14
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qianyuyan

铜虫 (小有名气)

挺多的 我按以前的方法做的 这次长得蓝斑就是不多 胶回收纯度还行吧 跑电泳 单挑带 会不会是PCR产物放置的时间太久呢?
引用回帖:
Originally posted by huanshi at 2009-8-8 13:46:
长出的白色菌落多吗??

有部分白色菌落可能并非重组质粒,有可能你的X-gal涂的不均匀,有些地方就没有X-gal,出现假阳性。。

另外,你胶回收产物的纯度怎么样??

9楼2009-08-08 22:34:41
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huanshi

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by qianyuyan at 2009-8-8 22:34:
挺多的 我按以前的方法做的 这次长得蓝斑就是不多 胶回收纯度还行吧 跑电泳 单挑带 会不会是PCR产物放置的时间太久呢?

感觉不是pcr产物放置时间过长的原因。。

你再做次转化试试,下次挑菌落时,尽量挑取邻近蓝色菌落的白色菌落。。

另外,实在不行,你提个质粒,做酶切鉴定。。
10楼2009-08-09 16:04:31
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