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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组质粒筛选
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qianyuyan

铜虫 (小有名气)

[交流] 重组质粒筛选

我做Race后的产物隔了一天才做回收的，回收后就做T-A连接转化了，长出白色菌落。可是用巢式引物，通过菌落PCR来验证时，就是得不到我所需要的重组质粒。但是胶回收产物用巢式引物做PCR时，是有我所需要的条带。
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1楼 2009-08-08 13:38:31
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liugang66

铁杆木虫 (职业作家)

小鸟伯德
★
qianyuyan(金币+1):谢谢参与
不是很懂，帮顶
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有梦就有力量，有心就会成功！
2楼2009-08-08 13:39:10
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huanshi

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
qianyuyan(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-8 13:56
长出的白色菌落多吗？？

有部分白色菌落可能并非重组质粒，有可能你的X-gal涂的不均匀，有些地方就没有X-gal，出现假阳性。。

另外，你胶回收产物的纯度怎么样？？
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3楼2009-08-08 13:46:43
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hong303030

金虫 (小有名气)
★
qianyuyan(金币+1):谢谢参与
白色菌落可能是假阳性
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4楼2009-08-08 14:06:28
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司马诸葛

木虫 (正式写手)
★
qianyuyan(金币+1):谢谢参与
帮顶
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5楼2009-08-08 14:39:58
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蓝皮鼠7983
★
qianyuyan(金币+1):谢谢参与
6楼2009-08-08 16:58:40
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695

木虫 (职业作家)
多挑几个白色菌落试试，不过有时候这个蓝白斑还是不够准确，也可能是我们技术不到家吧
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7楼2009-08-08 17:58:46
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jpeng6118

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到相似的问题了，帮顶~
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8楼2009-08-08 18:05:14
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qianyuyan

铜虫 (小有名气)
挺多的 我按以前的方法做的 这次长得蓝斑就是不多 胶回收纯度还行吧 跑电泳 单挑带 会不会是PCR产物放置的时间太久呢？
引用回帖:
Originally posted by huanshi at 2009-8-8 13:46:
长出的白色菌落多吗？？

有部分白色菌落可能并非重组质粒，有可能你的X-gal涂的不均匀，有些地方就没有X-gal，出现假阳性。。

另外，你胶回收产物的纯度怎么样？？

赞一下 回复此楼
9楼2009-08-08 22:34:41
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huanshi

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by qianyuyan at 2009-8-8 22:34:
挺多的 我按以前的方法做的 这次长得蓝斑就是不多 胶回收纯度还行吧 跑电泳 单挑带 会不会是PCR产物放置的时间太久呢？

感觉不是pcr产物放置时间过长的原因。。

你再做次转化试试，下次挑菌落时，尽量挑取邻近蓝色菌落的白色菌落。。

另外，实在不行，你提个质粒，做酶切鉴定。。
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10楼2009-08-09 16:04:31
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