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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大神们，PCR引物C端如何加蛋白标签flag？
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者清若123456将赠送您 5 个金币

清若123456

新虫 (小有名气)

[求助] 求助大神们，PCR引物C端如何加蛋白标签flag？

急急急，求大神们救救急（。。。。。。。。。。。。。。。。凑字数。。。。。。。。。。。。。。。。。前面的帖子以及删了，怎么这个还提示
对不起，您已经发过类似内容的主题了，请不要一帖多发哦发不了）

老师让我在引物（PCR引物）序列中引入蛋白标签flag，方便后续的纯化。我的蛋白是分泌蛋白，我查到分泌蛋白一般建议把标签插在C端，求问大神们，我这样设计对不对？

上游引物F ：CCC（保护碱基）+ AAGCTT （酶切位点）+ KOZAK序列 +引物序列+GATTACAAGGATGACGACGATAAG（标签序列）

下游引物R：GC（保护碱基）+ GTCGAC（酶切位点） +引物序列 +CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC（flag标签序列反向互补）

我之前查的有人说说标签蛋白只需要加在上游引物就行，下游不用加？但那样两个的TM值不就差距很大了吗？
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1楼 2021-04-02 14:41:13
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
你要加在 C端，当然是只用在反向引物中加了啊。你设计的这个，到时候两段都有标签。

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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
3楼2021-04-02 18:52:15
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goblin7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-03 07:50:40
enmmmm那应该是flag
我的我的
...

还有你上面的那个问题，我一般用软件设计，如果你人工设计，有一个算是小技巧吧。
就你就跟上游一样设计下游，然后反向互补送公司合成就行了

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11楼2021-04-03 07:54:34
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普通回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
你这个，搞错了。

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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2021-04-02 18:51:13
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goblin7

新虫 (小有名气)
首先，那个应该是tag标签吧

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4楼2021-04-02 20:08:22
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goblin7

新虫 (小有名气)
其次

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5楼2021-04-02 20:08:51
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goblin7

新虫 (小有名气)
其次，这样p的话出来的产物3端和5端都有tag哦

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6楼2021-04-02 20:09:53
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goblin7

新虫 (小有名气)
TM值我也走想过之前，一方面其实相差不会太大，他相比于你的目的基因影响不大的，另一方面，你实在担心就在保护碱基上调整一下

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7楼2021-04-02 20:11:27
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清若123456

新虫 (小有名气)
内容已删除
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8楼2021-04-02 22:11:44
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清若123456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-02 20:08:22
首先，那个应该是tag标签吧

啊，是我查错了嘛？我在网上查到的flag标签就是这个啊？求大神指正。
求助大神们，PCR引物C端如何加蛋白标签flag？



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9楼2021-04-02 22:18:05
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goblin7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 清若123456 at 2021-04-02 22:18:05
啊，是我查错了嘛？我在网上查到的flag标签就是这个啊？求大神指正。

...

enmmmm那应该是flag
我的我的

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10楼2021-04-03 07:50:40
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