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清若123456

新虫 (小有名气)

[求助] 求助大神们,PCR引物C端如何加蛋白标签flag?

急急急,求大神们救救急(。。。。。。。。。。。。。。。。凑字数。。。。。。。。。。。。。。。。。前面的帖子以及删了,怎么这个还提示
对不起,您已经发过类似内容的主题了,请不要一帖多发哦发不了)

老师让我在引物(PCR引物)序列中引入蛋白标签flag,方便后续的纯化。我的蛋白是分泌蛋白,我查到分泌蛋白一般建议把标签插在C端,求问大神们,我这样设计对不对?

上游引物F :CCC(保护碱基)+ AAGCTT (酶切位点)+ KOZAK序列 +引物序列+GATTACAAGGATGACGACGATAAG(标签序列)

下游引物R:GC(保护碱基)+ GTCGAC(酶切位点) +引物序列 +CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC(flag标签序列反向互补)

我之前查的有人说说标签蛋白只需要加在上游引物就行,下游不用加?但那样两个的TM值不就差距很大了吗?
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

你要加在 C端,当然是只用在反向引物中加了啊。你设计的这个,到时候两段都有标签。

发自小木虫Android客户端
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
3楼2021-04-02 18:52:15
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goblin7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-03 07:50:40
enmmmm那应该是flag
我的我的
...

还有你上面的那个问题,我一般用软件设计,如果你人工设计,有一个算是小技巧吧。
就你就跟上游一样设计下游,然后反向互补送公司合成就行了

发自小木虫Android客户端
11楼2021-04-03 07:54:34
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普通回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼2021-04-02 18:51:13
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goblin7

新虫 (小有名气)

首先,那个应该是tag标签吧

发自小木虫Android客户端
4楼2021-04-02 20:08:22
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goblin7

新虫 (小有名气)

5楼2021-04-02 20:08:51
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goblin7

新虫 (小有名气)

其次,这样p的话出来的产物3端和5端都有tag哦

发自小木虫Android客户端
6楼2021-04-02 20:09:53
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goblin7

新虫 (小有名气)

TM值我也走想过之前,一方面其实相差不会太大,他相比于你的目的基因影响不大的,另一方面,你实在担心就在保护碱基上调整一下

发自小木虫Android客户端
7楼2021-04-02 20:11:27
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清若123456

新虫 (小有名气)

内容已删除
8楼2021-04-02 22:11:44
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清若123456

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-02 20:08:22
首先,那个应该是tag标签吧

啊,是我查错了嘛?我在网上查到的flag标签就是这个啊?求大神指正。
求助大神们,PCR引物C端如何加蛋白标签flag?



发自小木虫Android客户端
9楼2021-04-02 22:18:05
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goblin7

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 清若123456 at 2021-04-02 22:18:05
啊,是我查错了嘛?我在网上查到的flag标签就是这个啊?求大神指正。

...

enmmmm那应该是flag
我的我的

发自小木虫Android客户端
10楼2021-04-03 07:50:40
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