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求助大神们，PCR引物C端如何加蛋白标签flag？
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急急急，求大神们救救急（。。。。。。。。。。。。。。。。凑字数。。。。。。。。。。。。。。。。。前面的帖子以及删了，怎么这个还提示 对不起，您已经发过类似内容的主题了，请不要一帖多发哦发不了） 老师让我在引物（PCR引物）序列中引入蛋白标签flag，方便后续的纯化。我的蛋白是分泌蛋白，我查到分泌蛋白一般建议把标签插在C端，求问大神们，我这样设计对不对？ 上游引物F ：CCC（保护碱基）+ AAGCTT （酶切位点）+ KOZAK序列 +引物序列+GATTACAAGGATGACGACGATAAG（标签序列） 下游引物R：GC（保护碱基）+ GTCGAC（酶切位点） +引物序列 +CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC（flag标签序列反向互补） 我之前查的有人说说标签蛋白只需要加在上游引物就行，下游不用加？但那样两个的TM值不就差距很大了吗？ |
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