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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大神们，PCR引物C端如何加蛋白标签flag？
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者清若123456将赠送您 5 个金币

goblin7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-03 07:50:40
enmmmm那应该是flag
我的我的
...

还有你上面的那个问题，我一般用软件设计，如果你人工设计，有一个算是小技巧吧。
就你就跟上游一样设计下游，然后反向互补送公司合成就行了

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11楼2021-04-03 07:54:34
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 清若123456 at 2021-04-02 22:11:44
噢噢，大神你的意思是N端加标签就加在上游引物，C端标签加在下游引物对吧？
我之前看到N端加的蛋白标签在引物序列之前，那我这个C端的蛋白标签在引物后面还是前面啊？是下面这样吗？（新手，问题比较小白，大神您 ...

注意终止密码子的位置。

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12楼2021-04-03 07:57:26
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清若123456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-04-03 07:57:26
注意终止密码子的位置。
...

大神，你的意思是下游引物的蛋白标签应该在引物序列之前吗？是这样吗？
上游引物F ：CG（保护碱基）+ AAGCTT （酶切位点）+ KOZAK序列 +引物序列
下游引物R：CG（保护碱基）+ GTCGAC（酶切位点） +蛋白标签序列 +引物序列
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13楼2021-04-03 12:25:12
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清若123456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-03 07:54:34
还有你上面的那个问题，我一般用软件设计，如果你人工设计，有一个算是小技巧吧。
就你就跟上游一样设计下游，然后反向互补送公司合成就行了
...

引物设计我也用的Prime5软件，师姐跟我说设计完把保护碱基酶切位点加上去就行。迷惑的点就是蛋白标签位置应该加在哪里？师姐她之前也没有这个经验。大神，那你这层楼的意思我没大懂。你看可以顺序可以这么来吗？
上游引物F ：CG（保护碱基）+ AAGCTT （酶切位点）+ KOZAK序列 +引物序列
下游引物R：CG（保护碱基）+ GTCGAC（酶切位点） +蛋白标签序列 +引物序列
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14楼2021-04-03 12:32:21
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goblin7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 清若123456 at 2021-04-03 12:32:21
引物设计我也用的Prime5软件，师姐跟我说设计完把保护碱基酶切位点加上去就行。迷惑的点就是蛋白标签位置应该加在哪里？师姐她之前也没有这个经验。大神，那你这层楼的意思我没大懂。你看可以顺序可以这么来吗 ...

酶切位点没错的话，俺觉得应该是对的
你记得"反向互补"哈

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清若123456
15楼2021-04-03 16:11:55
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清若123456

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by goblin7 at 2021-04-03 16:11:55
酶切位点没错的话，俺觉得应该是对的
你记得"反向互补"哈
...

“反向互补”？大神你是说引物序列和对应的基因CDS区反向互补吗？但那个不是软件设计出来就是互补的嘛，还需要专门注意？

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16楼2021-04-03 18:03:04
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