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冰糖胡鲁

新虫 (初入文坛)


[交流] 公司给的测序结果和参考序列对不上请问是什么原因?

请问公司给的测序结果和参考序列对不上是什么原因?可能是样品问题吗?克隆的是DNA,是用NCBI已知序列设计的引物,pcr出来跑胶大小也对的上,没连接载体的情况下可能测出序列吗?
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abcjlm

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by 冰糖胡鲁 at 2021-04-02 12:43:29
请问公司给的测序结果和参考序列对不上是什么原因?可能是样品问题吗?克隆的是DNA,是用NCBI已知序列设计的引物,pcr出来跑胶大小也对的上,没连接载体的情况下可能测出序列吗?

看你之前的帖子,你的基因是逆转录来的吗

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7楼2021-04-07 20:50:44
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grm枫

铁虫 (初入文坛)



冰糖胡鲁(金币+1): 谢谢参与
pcr产物可以直接送测序公司测序,如果测序结果与参考序列不符,可能非特异扩增了(可能存在同源性较高的基因序列)
4楼2021-04-07 11:09:44
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abcjlm

铜虫 (小有名气)



冰糖胡鲁(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by 冰糖胡鲁 at 2021-04-02 12:43:29
请问公司给的测序结果和参考序列对不上是什么原因?可能是样品问题吗?克隆的是DNA,是用NCBI已知序列设计的引物,pcr出来跑胶大小也对的上,没连接载体的情况下可能测出序列吗?

首先测序出来的结果在ncbi 对比一下,主要是你准备拿这段序列做什么,一般PCR突变概率是比较低的,如果出现很多差异,就考虑一下样品,如果做克隆表达,你看一下翻译后氨基酸的差异

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6楼2021-04-07 20:39:42
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tzynew2楼
2021-04-02 12:46   回复  
冰糖胡鲁(金币+1): 谢谢参与
i 发自小木虫Android客户端
bjdxyxy5楼
2021-04-07 15:49   回复  
冰糖胡鲁(金币+1): 谢谢参与
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