原核表达蛋白诱导问题 - 分子生物 - 生物化学 - 小木虫论坛-学术科研互动平台

ameba

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这个没有背景介绍，无法分析

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2楼2021-04-01 08:09:36

小野说

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这种情况还是比较少见的，因为你说的载体还是比较常见的，相比pGEX，pet还是有一些不同的，我想问一下，你采用化转的时候，转化子是不是非常多？

3楼2021-04-01 11:02:04

JH5HJ

禁虫 (正式写手)

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4楼2021-04-01 14:13:31

小野说

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引用回帖:

4楼: Originally posted by JH5HJ at 2021-04-01 14:13:31
完整质粒转化到大肠杆菌中，阳性的转化子肯定很多呀
...

结果一样有两种情况，第一种是有表达，第二种是没表达。代表的问题是不一样的。首先要确认是否存在表达。从你的情况我感觉是没有表达，质粒构建正确是第一步，其中你要确认读码框是正确读码的，这很重要。其次要看是否存在稀有密码子。以上2点要确认好。质粒构建和转化都很容易，但转化子不要特别多，我之前的一个项目就是这个问题导致的假阴性。

5楼2021-04-01 16:55:17

扫雪煎茶

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 小野说 at 2021-04-01 16:55:17
结果一样有两种情况，第一种是有表达，第二种是没表达。代表的问题是不一样的。首先要确认是否存在表达。从你的情况我感觉是没有表达，质粒构建正确是第一步，其中你要确认读码框是正确读码的，这很重要。其次要看 ...

想问一下稀有密码子会有什么影响呢

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6楼2021-04-08 23:13:35