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c3024034

银虫 (正式写手)

[交流] 【交流/求助】质粒提取求助

为什么经过3种抗生素筛选后,还是提不出质粒???可能是致力丢失吗?


我的是一种农杆菌 里面的质粒有绿色荧光蛋白基因  现在我想设计一对引物把这个基因钓出来  但却没成功  我觉的是不是质粒丢失了 但如果丢失 那为什么可以抗抗生素

[ Last edited by amisking on 2010-1-11 at 17:26 ]
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juke9910

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-8 23:30
能不能把问题说清楚呢?怎么提不出来?我以前遇到过挑单克隆摇管的时候,摇出来的菌液发白,离心下来的菌体很白,用Tiangen的试剂盒加上P2不能澄清,加入P3沉淀异常,听别人说是酵母污染,也不知道怎么回事。不知道你是不是这种情况呢
2楼2009-08-07 18:57:34
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695

木虫 (职业作家)

没遇到过,不好意思
3楼2009-08-07 19:38:05
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c3024034

银虫 (正式写手)

我的是一种农杆菌 里面的质粒有绿色荧光蛋白基因  现在我想设计一对引物把这个基因钓出来  但却没成功  我觉的是不是质粒丢失了 但如果丢失 那为什么可以抗抗生素
4楼2009-08-07 20:10:10
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)


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可能时你的引物有问题啊,不是绿色荧光蛋白么,在confocal下看看有没荧光了,有就是没有丢,没有就不好说了
5楼2009-08-07 20:31:37
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c3024034

银虫 (正式写手)

谢谢 大家的意见
6楼2009-08-07 20:57:29
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chg952

金虫 (小有名气)

会不会是质粒没提好啊,我最近也在转农杆菌,还不小心把它放在37度培养了
7楼2009-08-08 00:44:30
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yanfeier

金虫 (小有名气)


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说的不是太详细   帮顶  
8楼2009-08-08 23:09:51
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水心

金虫 (初入文坛)


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农杆菌的质粒拷贝数太低,提取出来浓度很小。如果只想克隆基因的话,可以试试菌落PCR
9楼2009-08-09 11:23:21
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


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Agro 的plasmid比较难提,用的所有试剂要是E。coli的2倍,而且看你是什么菌株,EHA105 还是 LAB4404, EHA105更难提。
10楼2009-08-09 12:44:28
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