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十比

木虫 (著名写手)

[交流] RT-PCR 紧急求助

RT-PCR 紧急求助!!
现要P一个数据库中推定基因的ORF,但碥码区5‘与3’端的GC含量相差太大,我设计了两对引物,都没有P出任何条带了,我用其它的基因验证过cDNA的,应该没有问题?  我所要P的基因的5‘端包括UTR的GC含量非常高,但整个ORF的总体GC含量又不高,这种基因大家一般怎么设计引物啊?  请高手指点一下,很急啊??
万分感谢!
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主


十比(金币+1):谢谢参与
帮你顶
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-08-07 13:50:18
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lizhou691

金虫 (著名写手)


十比(金币+1):谢谢参与
路过,帮你顶一下
3楼2009-08-07 13:59:59
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greatsun

木虫 (正式写手)


十比(金币+1):谢谢参与
我看看!

希望能帮助你!!
4楼2009-08-07 14:52:34
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greatsun

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-7 15:17
建议用primer premier5软件设计引物,根据引物设计的原则设计引物,

然后到一个国内的在线引物评估软件上评估一下(09年发表在bioinformatics上),

很好用的(http://biocompute.bmi.ac.cn/MFEprimer/)。

一般情况这个在线软件能评估到你的引物合不合适。

希望对你有用吧。

[ Last edited by greatsun on 2009-8-7 at 15:08 ]
5楼2009-08-07 15:05:37
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njgreat

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫之火影忍者

帮顶一下O(∩_∩)O~
6楼2009-08-07 15:17:09
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695

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by greatsun at 2009-8-7 15:05:
建议用primer premier5软件设计引物,根据引物设计的原则设计引物,

然后到一个国内的在线引物评估软件上评估一下(09年发表在bioinformatics上),

很好用的([url]http://biocompute.bmi.ac.cn/MFEprimer/[/ ...

呵呵,这么强大功效的网址,多谢了
7楼2009-08-07 17:30:23
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十比

木虫 (著名写手)

我知道按照引物软件,我的引物肯定是有问题的?
我想问的是我想仅得到ORF,就必须得从ORF两个最末端设计引物,所以没得选择,不知各位有遇到这类问题吗??
8楼2009-08-07 20:57:36
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清泉

木虫 (著名写手)

呵呵


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我才开始学习,不过我见我师兄他们也在做,不过好像没你说的这个问题的!
宝剑锋从磨砺出,梅花香自苦寒来!
9楼2009-08-07 22:49:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得只要使用扩增能力强的酶,这些都不是什么大问题
10楼2009-08-07 22:55:06
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