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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR 紧急求助
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十比

木虫 (著名写手)

[交流] RT-PCR 紧急求助

RT-PCR 紧急求助！！
现要P一个数据库中推定基因的ORF，但碥码区5‘与3’端的GC含量相差太大，我设计了两对引物，都没有P出任何条带了，我用其它的基因验证过cDNA的，应该没有问题？  我所要P的基因的5‘端包括UTR的GC含量非常高，但整个ORF的总体GC含量又不高，这种基因大家一般怎么设计引物啊？  请高手指点一下，很急啊？？
万分感谢！
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1楼 2009-08-07 13:37:10
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
十比(金币+1):谢谢参与
帮你顶
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2009-08-07 13:50:18
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lizhou691

金虫 (著名写手)
★
十比(金币+1):谢谢参与
路过，帮你顶一下
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3楼2009-08-07 13:59:59
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greatsun

木虫 (正式写手)
★
十比(金币+1):谢谢参与
我看看！

希望能帮助你！！
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4楼2009-08-07 14:52:34
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greatsun

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-7 15:17
建议用primer premier5软件设计引物，根据引物设计的原则设计引物，

然后到一个国内的在线引物评估软件上评估一下(09年发表在bioinformatics上)，

很好用的(http://biocompute.bmi.ac.cn/MFEprimer/)。

一般情况这个在线软件能评估到你的引物合不合适。

希望对你有用吧。

[ Last edited by greatsun on 2009-8-7 at 15:08 ]
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5楼2009-08-07 15:05:37
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njgreat

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫之火影忍者
帮顶一下O(∩_∩)O~
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6楼2009-08-07 15:17:09
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695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by greatsun at 2009-8-7 15:05:
建议用primer premier5软件设计引物，根据引物设计的原则设计引物，

然后到一个国内的在线引物评估软件上评估一下(09年发表在bioinformatics上)，

很好用的([url]http://biocompute.bmi.ac.cn/MFEprimer/[/ ...

呵呵，这么强大功效的网址，多谢了
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7楼2009-08-07 17:30:23
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十比

木虫 (著名写手)
我知道按照引物软件，我的引物肯定是有问题的？
我想问的是我想仅得到ORF，就必须得从ORF两个最末端设计引物，所以没得选择，不知各位有遇到这类问题吗？？
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8楼2009-08-07 20:57:36
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清泉

木虫 (著名写手)

呵呵

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我才开始学习，不过我见我师兄他们也在做，不过好像没你说的这个问题的！
赞一下(1人) 回复此楼
宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来！
9楼2009-08-07 22:49:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得只要使用扩增能力强的酶，这些都不是什么大问题
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10楼2009-08-07 22:55:06
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