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等一个奇迹

新虫 (初入文坛)

[求助] 做过脂质体转染和流式的大佬帮帮忙 已有1人参与

前辈同仁们,最近刚开始接触细胞的脂质体转染和流式,用lipo2000做了hela细胞的转染,空载质粒是pcDNA3.1加GFP标签的,48小时后做流式发现细胞早凋率上升了二三十倍,重复实验和单因素实验都做了,就是想不通为什么转染这个空载质粒会影响细胞凋亡,各位前辈有用过这种质粒的吗?有什么好的建议吗?

做过脂质体转染和流式的大佬帮帮忙


@gyesang 发自小木虫Android客户端
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
转染试剂就是会有点儿毒性,质粒里也会带些内毒素。
如果比较介意这个情况,可以使用无内毒素的质粒提取试剂盒和低毒性的转染试剂(比如TRANSIT-LT1)
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-03-19 12:35:31
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等一个奇迹

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-03-19 12:35:31
转染试剂就是会有点儿毒性,质粒里也会带些内毒素。
如果比较介意这个情况,可以使用无内毒素的质粒提取试剂盒和低毒性的转染试剂(比如TRANSIT-LT1)

你好,我已经做过单因素实验,转染试剂和质粒对细胞的毒性很小,并且我用的就是去内毒素抽提的质粒,空载质粒的转染导致20%的早凋应该是不正常的吧

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3楼2021-03-19 13:34:11
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

引用回帖:
3楼: Originally posted by 等一个奇迹 at 2021-03-19 13:34:11
你好,我已经做过单因素实验,转染试剂和质粒对细胞的毒性很小,并且我用的就是去内毒素抽提的质粒,空载质粒的转染导致20%的早凋应该是不正常的吧
...

转染试剂都会有一些毒性,只是有时候比较低看不出来而已。
可以检测一下支原体,有时候细胞虽然有支原体污染,但是平时养得好好的看形态和增殖速率也看不出问题。但是一旦有一些压力存在(比如转染),细胞自身的压力达到一定阈值,就会有凋亡。
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-03-19 14:15:50
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等一个奇迹

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-03-19 14:15:50
转染试剂都会有一些毒性,只是有时候比较低看不出来而已。
可以检测一下支原体,有时候细胞虽然有支原体污染,但是平时养得好好的看形态和增殖速率也看不出问题。但是一旦有一些压力存在(比如转染),细胞自身的 ...

好的,我去做一下pcr 检测看看,先谢过

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5楼2021-03-19 18:44:21
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