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等一个奇迹

新虫 (初入文坛)

[求助] 做过脂质体转染和流式的大佬帮帮忙 已有1人参与

前辈同仁们，最近刚开始接触细胞的脂质体转染和流式，用lipo2000做了hela细胞的转染，空载质粒是pcDNA3.1加GFP标签的，48小时后做流式发现细胞早凋率上升了二三十倍，重复实验和单因素实验都做了，就是想不通为什么转染这个空载质粒会影响细胞凋亡，各位前辈有用过这种质粒的吗？有什么好的建议吗？

做过脂质体转染和流式的大佬帮帮忙


@gyesang 发自小木虫Android客户端
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1楼 2021-03-19 11:30:56
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转染试剂就是会有点儿毒性，质粒里也会带些内毒素。
如果比较介意这个情况，可以使用无内毒素的质粒提取试剂盒和低毒性的转染试剂（比如TRANSIT-LT1）
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-03-19 12:35:31
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等一个奇迹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-03-19 12:35:31
转染试剂就是会有点儿毒性，质粒里也会带些内毒素。
如果比较介意这个情况，可以使用无内毒素的质粒提取试剂盒和低毒性的转染试剂（比如TRANSIT-LT1）

你好，我已经做过单因素实验，转染试剂和质粒对细胞的毒性很小，并且我用的就是去内毒素抽提的质粒，空载质粒的转染导致20%的早凋应该是不正常的吧

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3楼2021-03-19 13:34:11
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
3楼: Originally posted by 等一个奇迹 at 2021-03-19 13:34:11
你好，我已经做过单因素实验，转染试剂和质粒对细胞的毒性很小，并且我用的就是去内毒素抽提的质粒，空载质粒的转染导致20%的早凋应该是不正常的吧
...

转染试剂都会有一些毒性，只是有时候比较低看不出来而已。
可以检测一下支原体，有时候细胞虽然有支原体污染，但是平时养得好好的看形态和增殖速率也看不出问题。但是一旦有一些压力存在（比如转染），细胞自身的压力达到一定阈值，就会有凋亡。
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-03-19 14:15:50
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等一个奇迹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-03-19 14:15:50
转染试剂都会有一些毒性，只是有时候比较低看不出来而已。
可以检测一下支原体，有时候细胞虽然有支原体污染，但是平时养得好好的看形态和增殖速率也看不出问题。但是一旦有一些压力存在（比如转染），细胞自身的 ...

好的，我去做一下pcr 检测看看，先谢过

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5楼2021-03-19 18:44:21
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