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野山椒

铁虫 (小有名气)

[交流] 毕赤酵母组成型表达外源蛋白

用毕赤酵母GS115表达外源蛋白,为组成型表达,大概在96h左右OD涨到了300左右,还有继续生长的趋势,但是取上清检测酶活和蛋白质含量,和摇瓶是一样的,基本上相当于只长菌不表达,有什么可能的原因?有没有哪位大神遇到过类似的情况,交流一下,谢谢!
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那一股酸辣味!
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野山椒

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wt3532 at 2021-03-17 16:46:46
你实验过程、诱导剂是什么、培养工艺怎么做的,都不知道,别人怎么给你提供建议。

不好意思,新手
我先挑取GS115单菌落到YPD上再接种到BMGY培养基上,长到一定浓度后按照接种量10%接种到发酵罐中,1.2L发酵罐,700毫升装液量,发酵培养基为BSM,初始pH控制在5,溶氧控制在20-50,初始搅拌速度300rpm,前期较高溶氧,OD涨到200多的时候溶氧控制在30左右,组成型表达,所以一直补加甘油,后期通过补加甘油速率和搅拌转速控制溶氧,最后OD涨到了400左右,但是检测上清蛋白含量和酶活都很低,和摇瓶差不多
所有很奇怪,实在想不出哪出了问题
那一股酸辣味!
3楼2021-03-17 17:13:04
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
野山椒: 金币+1, 谢谢 2021-03-17 17:13:21
你实验过程、诱导剂是什么、培养工艺怎么做的,都不知道,别人怎么给你提供建议。
2楼2021-03-17 16:46:46
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匿名


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
4楼2021-04-26 17:18:31
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Glorious47

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你用的什么启动子

发自小木虫IOS客户端
5楼2021-05-18 13:38:40
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