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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教问题，cDNA会不会掺入mRNA前体？
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jianggl

铜虫 (初入文坛)

[交流] 请教问题，cDNA会不会掺入mRNA前体？

没做过cDNA文库的实验，有个疑问请教大家。
在创建cDNA文库的时候，最后建成的cDNA文库应该是不含有内含子序列的，但是，提取mRNA会不会把细胞核内的mRNA前体掺杂进来？什么样的技术避免这一情况？实际创建cDNA文库时是否已绝对避免此问题产生？
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1楼 2009-08-05 09:25:18
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司马诸葛
★
jianggl(金币+1):谢谢参与
顶一下下
2楼2009-08-05 10:22:43
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112976553

金虫 (小有名气)
★
jianggl(金币+1):谢谢参与
LZ构建CDNA文库所谓何呢？ 无非是看你所需要基因的表达量。渗入了mRNA前体也无所谓。
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3楼2009-08-05 10:57:42
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jianggl

铜虫 (初入文坛)
我不做实验。
如果有mRNA前体掺入，那由此得到所谓外显子的数据就不真实了。我在想这个问题，不是要看表达量
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4楼2009-08-05 11:07:03
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
jianggl(金币+1):谢谢参与
反转录之后应该是会有少量的RNA残留，加点RNase消化一下，或者干脆做个切胶回收就行了吧。
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5楼2009-08-05 11:11:26
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huanshi

银虫 (小有名气)
★
jianggl(金币+1):谢谢参与
对，外显子数据并不是完全真实的。。。
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6楼2009-08-05 11:16:40
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huayingxin

木虫 (著名写手)

虫之圣者
★
jianggl(金币+1):谢谢参与
有RNA很正常。还是跑胶回收胶，会好些。
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无端更渡桑乾水,却望并州是故乡
7楼2009-08-05 13:24:17
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jianggl

铜虫 (初入文坛)
唉，怎么会有RNA很正常，本来就是提取RNA的，有前体RNA吧？
那请问，数据库中外显子数据都是从蛋白序列得来的吗？那似乎不太可能推算那么多。
还是从基因DNA序列推算来的？外显子序列两端保守吗？
谢谢参与！

[ Last edited by jianggl on 2009-8-6 at 09:02 ]
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8楼2009-08-06 08:57:48
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
RNA前体的量应该很少吧,另外在细胞核中,我认为可能性比较小.应该不用担心这个问题.
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9楼2009-08-06 09:29:04
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jianggl

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by michaelwuqingyu at 2009-8-6 09:29:
RNA前体的量应该很少吧,另外在细胞核中,我认为可能性比较小.应该不用担心这个问题.

我希望有一些数据或文献能证实这一点，而不是推测。
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10楼2009-08-07 22:54:03
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