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jianggl

铜虫 (初入文坛)

[交流] 请教问题,cDNA会不会掺入mRNA前体?

没做过cDNA文库的实验,有个疑问请教大家。
在创建cDNA文库的时候,最后建成的cDNA文库应该是不含有内含子序列的,但是,提取mRNA会不会把细胞核内的mRNA前体掺杂进来?什么样的技术避免这一情况?实际创建cDNA文库时是否已绝对避免此问题产生?
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jianggl(金币+1):谢谢参与
顶一下下
2楼2009-08-05 10:22:43
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112976553

金虫 (小有名气)


jianggl(金币+1):谢谢参与
LZ构建CDNA文库所谓何呢? 无非是看你所需要基因的表达量。渗入了mRNA前体也无所谓。
3楼2009-08-05 10:57:42
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jianggl

铜虫 (初入文坛)

我不做实验。
如果有mRNA前体掺入,那由此得到所谓外显子的数据就不真实了。我在想这个问题,不是要看表达量
4楼2009-08-05 11:07:03
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


jianggl(金币+1):谢谢参与
反转录之后应该是会有少量的RNA残留,加点RNase消化一下,或者干脆做个切胶回收就行了吧。
5楼2009-08-05 11:11:26
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huanshi

银虫 (小有名气)


jianggl(金币+1):谢谢参与
对,外显子数据并不是完全真实的。。。
6楼2009-08-05 11:16:40
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huayingxin

木虫 (著名写手)

虫之圣者


jianggl(金币+1):谢谢参与
有RNA很正常。还是跑胶回收胶,会好些。
无端更渡桑乾水,却望并州是故乡
7楼2009-08-05 13:24:17
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jianggl

铜虫 (初入文坛)

唉,怎么会有RNA很正常,本来就是提取RNA的,有前体RNA吧?
那请问,数据库中外显子数据都是从蛋白序列得来的吗?那似乎不太可能推算那么多。
还是从基因DNA序列推算来的?外显子序列两端保守吗?
谢谢参与!

[ Last edited by jianggl on 2009-8-6 at 09:02 ]
8楼2009-08-06 08:57:48
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
RNA前体的量应该很少吧,另外在细胞核中,我认为可能性比较小.应该不用担心这个问题.
9楼2009-08-06 09:29:04
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jianggl

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by michaelwuqingyu at 2009-8-6 09:29:
RNA前体的量应该很少吧,另外在细胞核中,我认为可能性比较小.应该不用担心这个问题.

我希望有一些数据或文献能证实这一点,而不是推测。
10楼2009-08-07 22:54:03
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