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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酵母双杂交求助
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tancf

金虫 (小有名气)

[交流] 酵母双杂交求助

想通过构建酵母双杂交系统来筛选雌激素受体（ER）的活性化合物，酵母菌株选用AH109，载体：pGADT7,pGBKT7。
重组载体已经构建好了，测序正确。将构建好的AD和BD载体转到酵母细胞里时出问题了：转化好后，怎么也筛不出阳性菌株来。已经重复过好几遍了，总是失败。请高手指点！
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1楼 2009-08-04 13:28:36
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njgreat

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫之火影忍者
★ ★ ★ ★
tancf(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3,VIP+0):鼓励一下！ 8-5 17:37
转化的过程中，一定要按照说明来，动作该轻一定要轻，否则转化很容易失败，你也可以找个明白一点的替你做一下，如果还长不出来，那就是有可能是别的原因的问题了，我也就知道这些了，希望很明白的同仁能跟帖
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2楼2009-08-04 13:40:51
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tancf

金虫 (小有名气)
谢谢哈~我们实验室也是刚接触这类实验，得摸索着来了
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3楼2009-08-04 13:54:34
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luqin114

铜虫 (小有名气)

顶一下

★
tancf(金币+1):谢谢参与
呵呵  不知道顶一下了
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4楼2009-08-04 16:53:52
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tancf

金虫 (小有名气)
5楼2009-08-04 16:54:52
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
★
tancf(金币+1):谢谢参与
SSDNA要事先煮沸加热，然后立即放在冰上。
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6楼2009-08-04 18:40:25
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
不妨试试三负的平板。
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7楼2009-08-04 18:41:26
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
tancf(金币+1):谢谢参与
帮你顶贴
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
8楼2009-08-04 19:09:52
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咖啡加点盐7630

金虫 (正式写手)
★
tancf(金币+1):谢谢参与
筛不出阳性菌株，是假阳性太高吧？  考虑一下载体是不是可能发生自联，片段连接入载体时可适当降低载体的摩尔浓度。
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All this for a loaf of bread？
9楼2009-08-04 19:27:10
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xiaoguniang

金虫 (小有名气)
★
tancf(金币+1):谢谢参与
没做过这样的实验，参与进来学习一下！
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10楼2009-08-04 20:14:41
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