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tancf

金虫 (小有名气)

[交流] 酵母双杂交求助

想通过构建酵母双杂交系统来筛选雌激素受体(ER)的活性化合物,酵母菌株选用AH109,载体:pGADT7,pGBKT7。
重组载体已经构建好了,测序正确。将构建好的AD和BD载体转到酵母细胞里时出问题了:转化好后,怎么也筛不出阳性菌株来。已经重复过好几遍了,总是失败。请高手指点!
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咖啡加点盐7630

金虫 (正式写手)


tancf(金币+1):谢谢参与
筛不出阳性菌株,是假阳性太高吧?  考虑一下载体是不是可能发生自联,片段连接入载体时可适当降低载体的摩尔浓度。
All this for a loaf of bread?
9楼2009-08-04 19:27:10
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njgreat

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫之火影忍者

★ ★ ★ ★
tancf(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3,VIP+0):鼓励一下! 8-5 17:37
转化的过程中,一定要按照说明来,动作该轻一定要轻,否则转化很容易失败,你也可以找个明白一点的替你做一下,如果还长不出来,那就是有可能是别的原因的问题了,我也就知道这些了,希望很明白的同仁能跟帖
2楼2009-08-04 13:40:51
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tancf

金虫 (小有名气)

谢谢哈~我们实验室也是刚接触这类实验,得摸索着来了
3楼2009-08-04 13:54:34
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luqin114

铜虫 (小有名气)

顶一下


tancf(金币+1):谢谢参与
呵呵  不知道顶一下了
4楼2009-08-04 16:53:52
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