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ToSoul小明

新虫 (小有名气)

[交流] 关于色谱柱

各位,最近用10%FA处理血浆样品,没有蛋白沉淀,但是离心后仍然取上清复溶进样了,走了几十针样品,发现柱压升高了几倍,是不是柱子被蛋白堵住了

关于色谱柱


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zinfly

专家顾问 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
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ToSoul小明: 金币+5 2021-03-24 10:42:38
真的是有钱啊。。。。蛋白不沉淀,至少是稀释一下吧,但愿你有保护柱,拆了换就好,毕竟300左右一个。
这样的一般低流速长时间冲,或者反冲,最好是咨询工程师。
ps,1.2w PSI还好,毕竟还有3k上升的空间。通常情况都是降速。
2楼2021-03-16 14:29:37
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柳絮虫

新虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
ToSoul小明: 金币+3 2021-03-24 10:43:01
也不一定是柱子堵了,也许是系统堵了,最常见的是进样器堵了。热水洗系统试一试
3楼2021-03-21 10:45:28
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zhangsea

铜虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
甲酸加多了,反而沉淀效果不好
4楼2021-04-14 20:52:14
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t892893235

木虫 (著名写手)

范德姆特大对勾

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么不选择过滤后上机
5楼2021-04-15 08:58:11
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琛琛:

新虫 (正式写手)

甲酸达到30%才有沉淀蛋白的效果,10%太少,如果不想加有机溶剂或提高甲酸含量,也可以试一下沉淀蛋白板

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6楼2021-04-16 08:18:17
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ToSoul小明

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 琛琛: at 2021-04-16 08:18:17
甲酸达到30%才有沉淀蛋白的效果,10%太少,如果不想加有机溶剂或提高甲酸含量,也可以试一下沉淀蛋白板

有机试剂和蛋白沉淀板的提取效果不是很理想,最后选用的10%TFA,不知道会不会影响仪器或者柱子

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7楼2021-04-19 13:57:53
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心在自在

铜虫 (小有名气)

★
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用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脱能除去蛋白质污染
HPLC/HPCE
8楼2021-04-27 15:48:23
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