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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 关于DNS法测酶活的问题

DNS法测内切葡聚糖酶活的时候实验组和对照组的颜色都很深,我想是发酵液中已经含有一定的还原糖,这样的话OD 值就很小,是否说明内切酶酶活低呢?最近做的实验菌株经常遇到这样的问题,郁闷啦!
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liguanjun

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不论颜色深浅,应该都会有OD差异的吧
你可以适当稀释一下你的酶液再测
2楼2009-08-03 16:22:28
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smallcat227

木虫 (著名写手)

差值打吗?

对,楼上说的对,酶液稀释后测比较好,很多时候酶是过量的,底物太少测出来酶活很低
3楼2009-08-04 00:41:29
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王雨云

金虫 (小有名气)

就是实验组和对照组颜色深浅差不多了,所以OD值就小噻,稀释都没什么意义了。我的意思并不是说颜色太深测不出来,而是虽然颜色比较深,但差异小,读出来的OD值很小。DNS法本来就是跟据实验组和对照组的颜色差异来测酶活的,现在我的实验成了两者差异不大,所以测不出来。安利说对照组一般颜色很浅的,以前做的实验都是这样,但现在这些菌株做出来对照组的颜色也这么深了,我认为就是被测的发酵液本身就已经含有较多的还原糖,即便没有CMC-Na与酶反应。
4楼2009-08-04 09:10:58
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zhuangqli

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的对照灭活了吧?
如果差值小,说明你的酶的活性不高
对照颜色深,说明你的发酵液里面的还原糖含量较高。
如果可以的话,你也可以换一种发酵液试试
5楼2009-08-04 09:16:31
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王雨云

金虫 (小有名气)

肯定灭活了的。我的想法跟4楼的一样,看来只有换一种发酵液试试,估计就是酶活不高,得重新筛选!
6楼2009-08-04 11:31:34
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