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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于DNS法测酶活的问题
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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 关于DNS法测酶活的问题

DNS法测内切葡聚糖酶活的时候实验组和对照组的颜色都很深，我想是发酵液中已经含有一定的还原糖，这样的话OD 值就很小，是否说明内切酶酶活低呢？最近做的实验菌株经常遇到这样的问题，郁闷啦！
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1楼 2009-08-03 15:20:13
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liguanjun

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不论颜色深浅，应该都会有OD差异的吧
你可以适当稀释一下你的酶液再测
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2楼2009-08-03 16:22:28
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smallcat227

木虫 (著名写手)
差值打吗？

对，楼上说的对，酶液稀释后测比较好，很多时候酶是过量的，底物太少测出来酶活很低
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3楼2009-08-04 00:41:29
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王雨云

金虫 (小有名气)
就是实验组和对照组颜色深浅差不多了，所以OD值就小噻，稀释都没什么意义了。我的意思并不是说颜色太深测不出来，而是虽然颜色比较深，但差异小，读出来的OD值很小。DNS法本来就是跟据实验组和对照组的颜色差异来测酶活的，现在我的实验成了两者差异不大，所以测不出来。安利说对照组一般颜色很浅的，以前做的实验都是这样，但现在这些菌株做出来对照组的颜色也这么深了，我认为就是被测的发酵液本身就已经含有较多的还原糖，即便没有CMC-Na与酶反应。
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4楼2009-08-04 09:10:58
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zhuangqli

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的对照灭活了吧？
如果差值小，说明你的酶的活性不高
对照颜色深，说明你的发酵液里面的还原糖含量较高。
如果可以的话，你也可以换一种发酵液试试
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5楼2009-08-04 09:16:31
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王雨云

金虫 (小有名气)
肯定灭活了的。我的想法跟4楼的一样，看来只有换一种发酵液试试，估计就是酶活不高，得重新筛选！
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6楼2009-08-04 11:31:34
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