| 查看: 1866 | 回复: 4 | |||
twtilu木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助】ConA-Sepharose 4B装柱的操作步骤 已有2人参与
|
请高手帮帮忙，小女 在此谢了 |
回复此楼» 猜你喜欢
武汉一本高校招收材料、化学、高分子、纺织、生物相关专业硕士生
已经有0人回复
-
西南交通大学医学院招收生物医学工程和材料与化工专业硕士研究生
已经有15人回复
-
有机高分子材料论文润色/翻译怎么收费?
已经有65人回复
-
研究生招生
已经有0人回复
-
武汉纺织大学-材料学院-高分子结构与性能团队-招调剂-生物方向
已经有5人回复
-
接受考研调剂~武汉纺织大学招材料、化学、高分子、纺织、生物相关专业硕士生
已经有0人回复
-
聚左旋乳酸和聚双旋乳酸的区别
已经有0人回复
-
武汉纺织大学纺织学院接收调剂
已经有0人回复
-
武汉纺织大学-材料科学与工程学院-招 生物方向 硕士！
已经有0人回复
-
2026年武汉纺织大学国家杰青课题组招收调剂化学 生物 医学 食品 环境研究生
已经有13人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 柱层析时，部分样品保持上样前的颜色，，
已经有10人回复
- 凝胶层析和装柱以及柱效问题
已经有21人回复
- transcad 免安装，绿色软件
已经有47人回复
- 糖柱（钙型）使用时能不能不用柱温箱
已经有14人回复
- 辛烷磺酸钠对色谱柱有何影响
已经有13人回复
- 液相预热、柱平衡问题
已经有7人回复
- 柱子因为浓度差出现气泡
已经有7人回复
- 制备C-18柱问题
已经有6人回复
- 液相色谱预柱反着用，行吗
已经有14人回复
- 怎么用柱色谱分开这两个东西。
已经有27人回复
- 【求助】求干法装柱步骤、注意事项，有经验的朋友来分享下吧~~~
已经有5人回复
- 【求助】干法装柱及干法进样的具体操作
已经有11人回复
- 【求助】湿法装柱，干法上样的详细步骤
已经有16人回复
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dnp(金币+1,VIP+0):谢谢应助，请继续关注下这个问题，呵呵，谢谢:) 8-2 22:31
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dnp(金币+1,VIP+0):谢谢应助，请继续关注下这个问题，呵呵，谢谢:) 8-2 22:31
|
百度的。。。 琼脂糖凝胶电泳准备手册 准备干净的配胶板和电泳槽 注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象 选择电泳方法 一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。 正确选择凝胶浓度 对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。 适合的电泳缓冲液 常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。 电泳的合适电压和温度 电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA电泳，温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象 DNA样品的纯度和状态 注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐，用酚可以去除蛋白。注意变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA条带迁移。在上样前不要对DNA样品加热，用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。 DNA的上样 正确的DNA上样量是条带清晰的保证。注意太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊，而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。TIANGEN公司DNA分子量标准每次上样6ul即可得到清晰均匀的条带。 Marker的选择 DNA电泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正对照DNA来估计DNA片段大小。Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的，这样对目标片段大小的估计才比较准确。TIANGEN公司的DNA Marker条带清晰，亮度均匀，质量稳定，是您实验的首选。需要注意的是Marker的电泳同样也要符合DNA电泳的操作标准。如果选择λDNA/HindIII或者λDNA/EcoRI的酶切Marker，需要预先65℃加热5min，冰上冷却后使用。从而避免HindIII或EcoRI酶切造成的粘性接头导致的片段连接不规则或条带信号弱等现象。 凝胶的染色和观察 实验室常用的核酸染色剂是溴化乙啶（EB），染色效果好，操作方便，但是稳定性差，具有毒性。而其他系列例如SYBR Green，GelRed，虽然毒性小，但价格昂贵。TIANGEN公司的GeneGreen相比则是性价比高的低毒替代染料，其灵敏度比传统EB染料高10倍以上。注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长，如果激发波长不对，条带则不易观察，出现条带模糊的现象。 |
2楼2009-07-31 11:04:38
twtilu
木虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 5456.8
- 散金: 950
- 红花: 3
- 帖子: 477
- 在线: 179.7小时
- 虫号: 814485
- 注册: 2009-07-23
- 性别: GG
- 专业: 纳米医学
3楼2009-07-31 15:01:54
我也急需
 |
4楼2010-04-22 20:45:48
5楼2012-08-31 10:27:30
