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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 软琼脂克隆形成试验求助~~~~
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Jenny01123

新虫 (初入文坛)

[求助] 软琼脂克隆形成试验求助~~~~ 已有1人参与

请问有哪位 大神做过软琼脂克隆形成试验呀，我根据步骤做了之后，养了有一个星期了，细胞没有任何变化，不知道自己哪里出问题了？实验室里也没有其他人做过，希望能和有经验的师兄师姐师弟师妹交流一下，不胜感激~~~
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1楼 2021-02-02 19:18:46
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Jenny01123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-02-07 09:32:45
晃动的时候上层培养基会晃动是正常现象。换液的时候确实容易把最上层胶弄碎，不过一般不碍事，如果讲究的话可以在最上层的上面再铺一层不带细胞的软琼脂作为保护。
用的是Sigma的低熔点琼脂，A9045-10G。低熔点的 ...

那上层不带细胞的那层配的时候得浓度应该是多少呢？和底层一样吗？
我刚查了一下你所用的好像是agarose，但是老师让我买的是agar，用的也是sigma的。虽然这两者不太一样，但感觉好像都能做。
你可以分享一下你当时做这个试验的protocol吗？如果不介意的话，这是我的邮箱或者你加我也行，1161780245@qq.com
另外我看到有些文献里的图拍出来的背景是白色的，是不是直接把图片颜色变成黑白的？不知道这个怎么弄
感谢大神的指导~~花花送给你
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5楼2021-02-07 15:12:52
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先确定细胞是不是长起来了，一星期的话应该在显微镜下可以看到一簇一簇的细胞，一簇至少有五六个的样子。刚铺完的时候应该都是分散的一两个细胞。
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Jenny01123
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-02-03 11:41:39
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Jenny01123

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-02-03 11:41:39
先确定细胞是不是长起来了，一星期的话应该在显微镜下可以看到一簇一簇的细胞，一簇至少有五六个的样子。刚铺完的时候应该都是分散的一两个细胞。

我现在看到的细胞还是单个的，是不是我在拿的时候得注意一点，要不然会散？
还有就是在晃动的时候上层也会随着培养基动，这是正常的吗？
另外在换液的时候枪头很容易把上层胶弄碎？上层胶我配的是0.7%的浓度，下层配的是1.2%的浓度。
请问你当时做的用的是什么牌子的琼脂啊？
问题有点多，希望不要介意~~·感谢感谢
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3楼2021-02-05 20:48:29
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
3楼: Originally posted by Jenny01123 at 2021-02-05 20:48:29
我现在看到的细胞还是单个的，是不是我在拿的时候得注意一点，要不然会散？
还有就是在晃动的时候上层也会随着培养基动，这是正常的吗？
另外在换液的时候枪头很容易把上层胶弄碎？上层胶我配的是0.7%的浓度，下 ...

晃动的时候上层培养基会晃动是正常现象。换液的时候确实容易把最上层胶弄碎，不过一般不碍事，如果讲究的话可以在最上层的上面再铺一层不带细胞的软琼脂作为保护。
用的是Sigma的低熔点琼脂，A9045-10G。低熔点的软琼脂保证了当温度降到37度甚至更低的时候，软琼脂仍然可以保持液体状态一段时间。如果软琼脂没有降到足够温度就混合的话会把细胞烫死。
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-02-07 09:32:45
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