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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 各位帮忙分析一下这张电泳图!

最近在做载体构建,是将一个大约1700bp的基因插入到pCAMBIA1301上。首先PCR得到插入片段,片段与载体用Kpn I与BamH I双酶切后连接。然后提质粒。提出质粒来跑电泳。如图:从左到右1--14为提出的质粒。15--22为PCR验证结果。其中15以空载体pCAMBIA1301为模板,16--22模板为连接后载体。最后一道为DL2000 Marker。
    为什么有些质粒才2000bp呢?很郁闷啊!做了很长时间啦,一直没有作出来。今天又出现这种情况。我都快没有信心做下去啦。请各位帮帮分析一下!不胜感激!
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-28 22:11
Anson1358(金币+1,VIP+0): 7-29 08:11
你这跟随我做的类似,我也在进行中.关键是连接的问题, 在保证基因和载体都完全酶切的情况下,试试不同的连接体系,选用不同的基因和载体比.多连几次看看.一般提出的质粒量是不会这么小的.
8楼2009-07-28 20:34:43
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smallcat227

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-28 22:10
那你的空载也有目的片段啊…

提出的质粒大部分是超螺旋状态的,电泳时比同样大小的线性DNA跑得快,所以显得小,3条带中间一条是比较接近实际质粒大小的
2楼2009-07-28 15:36:28
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

pCAMBIA 1301有11837bp呢。就是超螺旋状态也不会只有2000bp吧?
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2009-07-28 15:44:00
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695

木虫 (职业作家)

学习中,我也进行这块的
4楼2009-07-28 16:43:08
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