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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 各位帮忙分析一下这张电泳图！
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 各位帮忙分析一下这张电泳图！

最近在做载体构建，是将一个大约1700bp的基因插入到pCAMBIA1301上。首先PCR得到插入片段，片段与载体用Kpn I与BamH I双酶切后连接。然后提质粒。提出质粒来跑电泳。如图：从左到右1--14为提出的质粒。15--22为PCR验证结果。其中15以空载体pCAMBIA1301为模板，16--22模板为连接后载体。最后一道为DL2000 Marker。
    为什么有些质粒才2000bp呢？很郁闷啊！做了很长时间啦，一直没有作出来。今天又出现这种情况。我都快没有信心做下去啦。请各位帮帮分析一下！不胜感激！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
1楼 2009-07-28 15:08:24
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
Anson1358(金币+1,VIP+0): 7-29 08:10
引用回帖:
Originally posted by Anson1358 at 2009-7-28 15:44:
pCAMBIA 1301有11837bp呢。就是超螺旋状态也不会只有2000bp吧？

不好意思，外行了……

是啊，超螺旋也不会那么小，你图片中的7-10和13、14是正常质粒是吧，建议做个酶切验证片段是否插入。PCR的话验证的话先保证你的质粒不能被引物结合，不过貌似15也扩增出了相似大小的片段
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6楼2009-07-28 20:14:51
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-28 22:10
那你的空载也有目的片段啊…

提出的质粒大部分是超螺旋状态的，电泳时比同样大小的线性DNA跑得快，所以显得小，3条带中间一条是比较接近实际质粒大小的
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2楼2009-07-28 15:36:28
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
pCAMBIA 1301有11837bp呢。就是超螺旋状态也不会只有2000bp吧？
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
3楼2009-07-28 15:44:00
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695

木虫 (职业作家)
学习中，我也进行这块的
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4楼2009-07-28 16:43:08
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