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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 各位帮忙分析一下这张电泳图!

最近在做载体构建,是将一个大约1700bp的基因插入到pCAMBIA1301上。首先PCR得到插入片段,片段与载体用Kpn I与BamH I双酶切后连接。然后提质粒。提出质粒来跑电泳。如图:从左到右1--14为提出的质粒。15--22为PCR验证结果。其中15以空载体pCAMBIA1301为模板,16--22模板为连接后载体。最后一道为DL2000 Marker。
    为什么有些质粒才2000bp呢?很郁闷啊!做了很长时间啦,一直没有作出来。今天又出现这种情况。我都快没有信心做下去啦。请各位帮帮分析一下!不胜感激!
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一个人可以不成功,但不可以不成长!
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mascotte

金虫 (正式写手)

我怀疑你电泳图上1-15道的2000bp大小的条带是污染的质粒,也许你的感受态细胞质量有问题,建议你可以先取一支感受态细胞,不加任何质粒,空转化一次涂板检验,工程菌污染是个大问题,这种情况需要提高抗生素浓度。
10楼2009-07-28 23:03:02
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