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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆检测出现非特异性扩增是不是没有连接上，还是转化处了问题，请教！
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] 克隆检测出现非特异性扩增是不是没有连接上，还是转化处了问题，请教！

克隆检测出现非特异性扩增是不是没有连接上，还是转化处了问题，请教！
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1楼 2009-07-28 11:41:29
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)
★
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这个里面的问题很多,你要写出你详细的实验过程才好.
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2楼2009-07-28 11:47:42
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kxjh

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR的各个环节设置不好都有可能引起非特异扩增。
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3楼2009-07-28 14:51:43
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695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
恩，每个环节都可能出问题，楼主还是仔细分析下为好，看是PCR还是连接，转化出了问题
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4楼2009-07-28 16:39:00
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你的PCR没有得到单一的条带，即使回收也不会得到非常纯的目的条带，因而连接时就有可能将非目的基因条带连接到载体上，建议多挑取单克隆进行验证；一般目的片段较大，而非目的片段较小时会出现这样的问题。如果你的PCR得到了非常特异的单一条带，就可能是连接或转化时污染了其它东西！实验顺利哦！
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5楼2009-07-28 20:18:53
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
出现非特异性扩增,要先看看是不是PCR的问题,做个阳性对照看看,PCR条件没问题了,才能确定是不是连接的问题
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6楼2009-07-28 20:27:31
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