24小时热门版块排行榜    

查看: 1291  |  回复: 24
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

381466632

木虫 (正式写手)

[交流] pfu 的pcr问题

每次都p出来两条带,但是我的目的条带很弱,回收不出来。请教一下怎样可以增强我的目的,减少非特异性条带?谢谢。我用的是65 退火1分钟,延伸1分30秒。28循环。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

381466632

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by fz-xyz at 2009-7-28 08:45:
两条带的话可以用oligo看看到底是哪里的错配,之后修改Tm值。
或者直接尝试不同Tm值。
退火时间应该是根据目的条带长短确定的啊~

首先谢谢你,可不可以把oligo看错配说得详细点,学习一下。还有我的扩增条带1900左右。退火时间需要延长吗?
7楼2009-07-28 14:51:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

witch-dj

木虫 (著名写手)

快乐家族-witchdj

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
381466632(金币+1,VIP+0): 7-28 14:53
延伸时间增长为3min,退火温度在调节一下,根据引物的Tm值,试试看
2楼2009-07-28 08:09:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fz-xyz

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
381466632(金币+1,VIP+0):谢谢, 7-28 14:53
两条带的话可以用oligo看看到底是哪里的错配,之后修改Tm值。
或者直接尝试不同Tm值。
退火时间应该是根据目的条带长短确定的啊~
追求科学
3楼2009-07-28 08:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)


381466632(金币+1,VIP+0): 7-28 14:53
首先考虑降低退火温度,可以提高扩增效率。适当增加延伸时间,不过这个效果不是很明显。可以增加一些PCR增强剂,甘油可以抑制非特异扩增,BSA可以提高扩增效率。
4楼2009-07-28 10:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见