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野山椒铁虫 (小有名气)
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[交流]
用于酿酒酵母的pRS425质粒
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| 看不懂这个质粒是什么意思，上面的启动子都是用于原核的启动子，怎么在酿酒酵母中使用啊？有没有大佬帮忙解答一下 |
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野山椒: 金币+5, 谢谢 2021-03-18 10:56:48
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这个质粒上自带了三个基因，一个是ampr，另一个是leu2，还有一个是laczα。 其中ampr和laczα各自带一个原核启动子，leu2自带一个酵母内的启动子。 而这三个启动子都是为了行使质粒的正常功能构建的启动子，不能用来表达你的基因。 ampr的原核启动子用于表达氨苄抗性基因，因为质粒在构建完成后第一步要转入大肠扩增，ampr作为一个筛选标记。 leu2基因确保leu营养缺陷型的酵母可以在不含leu的平板上生长，是作为酵母转入质粒的筛选标记。 laczα中包含一个mcs位点，可以用于整合你的目的基因，整合后lacz基因被破坏，可以用于大肠的蓝白斑筛选。 三个基因都要求启动子和序列的完整，质粒才能正常行使功能。 而你如果要引入基因，通常是需要插入到mcs位点，这个目标基因是需要自带启动子和终止子的。也就是说你要整合上质粒的基因的结构是：promoter-orf-terminator的完整结构。 质粒本身没有提供给你表达目标基因的启动子。 不知道我有没有回答你的问题。希望我表达清楚了。 |
野山椒2楼2021-01-06 20:51:41
野山椒
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3楼2021-03-18 11:04:46
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