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野山椒

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[交流] 用于酿酒酵母的pRS425质粒

看不懂这个质粒是什么意思，上面的启动子都是用于原核的启动子，怎么在酿酒酵母中使用啊？有没有大佬帮忙解答一下

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1楼 2021-01-06 19:07:00

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iEmpire

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
野山椒: 金币+5, 谢谢 2021-03-18 10:56:48

这个质粒上自带了三个基因，一个是ampr，另一个是leu2，还有一个是laczα。
其中ampr和laczα各自带一个原核启动子，leu2自带一个酵母内的启动子。
而这三个启动子都是为了行使质粒的正常功能构建的启动子，不能用来表达你的基因。
ampr的原核启动子用于表达氨苄抗性基因，因为质粒在构建完成后第一步要转入大肠扩增，ampr作为一个筛选标记。
leu2基因确保leu营养缺陷型的酵母可以在不含leu的平板上生长，是作为酵母转入质粒的筛选标记。
laczα中包含一个mcs位点，可以用于整合你的目的基因，整合后lacz基因被破坏，可以用于大肠的蓝白斑筛选。
三个基因都要求启动子和序列的完整，质粒才能正常行使功能。
而你如果要引入基因，通常是需要插入到mcs位点，这个目标基因是需要自带启动子和终止子的。也就是说你要整合上质粒的基因的结构是：promoter-orf-terminator的完整结构。
质粒本身没有提供给你表达目标基因的启动子。
不知道我有没有回答你的问题。希望我表达清楚了。

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野山椒

2楼2021-01-06 20:51:41

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野山椒

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引用回帖:

2楼: Originally posted by iEmpire at 2021-01-06 20:51:41
这个质粒上自带了三个基因，一个是ampr，另一个是leu2，还有一个是laczα。
其中ampr和laczα各自带一个原核启动子，leu2自带一个酵母内的启动子。
而这三个启动子都是为了行使质粒的正常功能构建的启动子，不能用 ...

非常感谢，由于一些原因，我刚看到，和我问几个朋友的回答一样，谢谢大佬！！！

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3楼2021-03-18 11:04:46

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