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Skye_eeeee

铁虫 (初入文坛)

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专业: 胶体与界面化学

[求助] 求助！做多肽的抑菌实验用PB会析出已有1人参与

应化本科生，不是学微生物的，只是导师要求做抑菌实验，都是靠实验室里前几届学生摸索出来的方法。
说下方法：
①多肽用蒸馏水配制出不同浓度；
②活化斜面的大肠杆菌后，用3ml的30mmol/l的 pb（十二水磷酸氢二钠 + 二水合磷酸二氢钠）把斜面的菌冲下来；
③稀释出浊度ok的菌液进行比浊（已通过预实验确定了浊度）；
④将不同浓度的多肽水溶液（200微升）+菌液（200微升）混合均匀，37.5℃下反应1h；
⑤后面就是梯度稀释和平板涂布。

问题来了，第④步混合好之后，多肽是没析出的，但是反应完后很明显地析出了，应该是不溶于pb的问题。这个多肽在以前就尝试用pb配，经过超声和加热都是不溶的，加了三氟乙醇再超声加热好像也不行，加了甲醇析出更厉害了。多肽能溶于蒸馏水，这次只是抱着侥幸心理试一下能不能做抑菌，就在反应完析出了。

想问下稀释涂布平板的抑菌实验，万一多肽能溶于生理盐水的话，能用生理盐水代替pb做吗？生理盐水和pb对大肠杆菌的渗透压等方面有影响吗？它俩做出来的空白组菌落数，有区别吗？

配制多肽溶液的时候，可以加入六氟异丙醇（hfip）之后再用原本的方法做抑菌吗，会不会在pb里不析出了？

如果用生理盐水代替或者六氟异丙醇增溶的方法不行，还有其他方法做多肽的抑菌实验吗？

有看到外文文献用液体培养基，但我看得一头雾水。如果可以的话，麻烦附上方法的一些资料，例如步骤、参考文献等等。

非常感谢大佬们的解答！！！