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[求助]
反向pcr
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求助大佬们一个关于反向pcr的问题。 我们主要是获得转基因片段的侧翼序列，反向pcr的功能就是能够根据已知的片段，去扩增旁边的未知片段。步骤是酶切，纯化，T4连接，pcr（两轮）。之前我们一直做的很好，今年6月份开始pcr没有条带。我用相同的方法给别人做（材料，引物不同）可以，说明我们实验室的试剂，我的手法是没有问题的，但是自己的材料怎么也做不出来，我一直怀疑是引物的问题，现在已经黔驴技穷了，不知道从什么地方改进，能想到的方法我都想了，改进pcr体系，换酶，连接体系等，求求大家提点建议啊 |
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