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wym77

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化析出

蛋白等电点为7.22,我用的缓冲液是磷酸缓冲液,pH为8.0,500mM的NaCl,500mM的咪唑,镍柱纯化蛋白,蛋白被洗下来以后,冰上放置,会随时间的增加,析出越多,2个小时就有沉淀生成,蛋白浓度在3mg/ml左右,后来在缓冲液中加了2mM的β-巯基乙醇,一样析出,离心取上清,我分别用离子浓度为150mM和400mM的透析液透析过夜,一样是析出,跪求大佬,这种情况应该考虑什么因素?谢谢
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teubebxn

新虫 (初入文坛)

你是在咪唑溶液中就析出吗
2楼2020-12-21 08:40:17
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夙湛梦落

新虫 (小有名气)

解决了吗?我的蛋白pI值为5.31,跟你的纯化条件一样,也是析出

发自小木虫Android客户端
3楼2021-03-18 18:45:56
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

降低洗脱咪唑浓度。洗脱完成后加适量甘油后透析。

发自小木虫Android客户端
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
4楼2021-03-18 19:29:27
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