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更深的蓝888

银虫 (小有名气)


[交流] 急!!两种质粒共转BL21问题,请高手支招!

各位请问两种质粒共同转化表达菌株BL21(DE3)为什么诱导不出带来呢?复制子不一样,抗性不一样,菌液pcr都有带,用的PH8.0 Tris HCl 裂解菌体,BL21 condon 稀有密码子对照菌株同样结果,一个蛋白诱导出来了,想要的目的蛋白没有诱导出来,实在想不通,目前正在将两种蛋白互换标签(PS:小木虫为什么不能发picture)
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引用回帖:
10楼: Originally posted by 天下苍凉 at 2022-01-30 09:52:59
我也想问一下,我在BL21DE3中共转了pET28a和pET22b,我两个蛋白都表达了。但是,我老师说这是不可以的。因为复制子一样的情况下,质粒不能共存。可是,我在培养基中添加了两种抗生素,难道不应该可以共存吗?

之前有理论说,如果复制子一样的两个质粒在同一宿主菌内会不兼容。

但是后面也有人发文章,说同样的pET质粒,不同抗性也可以表达出蛋白(因为抗性筛选压力吧)
11楼2022-01-30 10:56:55
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crashandburn

银虫 (正式写手)



更深的蓝888(金币+1): 谢谢参与
单独做都可以吗?

发自小木虫IOS客户端
6楼2020-12-15 07:23:32
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季末季末

新虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
共表达是需要抗性不一样么?不一样的话凃板的时候用哪个抗性呀

发自小木虫Android客户端
7楼2020-12-23 09:40:28
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更深的蓝888

银虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by 季末季末 at 2020-12-23 09:40:28
共表达是需要抗性不一样么?不一样的话凃板的时候用哪个抗性呀

在两个载体的抗性筛选就可以
8楼2020-12-25 20:43:14
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汪和烤羊排

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问你的问题解决了吗?我现在遇到了同样的问题,方便的话能不能私信一下我,我们互加一下微信讨论一下?谢谢!
9楼2021-04-07 20:08:35
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天下苍凉

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也想问一下,我在BL21DE3中共转了pET28a和pET22b,我两个蛋白都表达了。但是,我老师说这是不可以的。因为复制子一样的情况下,质粒不能共存。可是,我在培养基中添加了两种抗生素,难道不应该可以共存吗?
10楼2022-01-30 09:52:59
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bbrine

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我想请教一下,共同转化后涂板长菌也是16h吗,因为我试过共转化很多次,但在涂板后都没长菌
12楼2022-02-14 15:19:15
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简单回复
2020-12-14 13:47   回复  
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1
2020-12-14 16:30   回复  
更深的蓝888(金币+1): 谢谢参与
1
psylhh4楼
2020-12-14 23:08   回复  
更深的蓝888(金币+1): 谢谢参与
1
2020-12-15 04:03   回复  
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