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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 急！！两种质粒共转BL21问题，请高手支招！
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更深的蓝888

银虫 (小有名气)

[交流] 急！！两种质粒共转BL21问题，请高手支招！

各位请问两种质粒共同转化表达菌株BL21（DE3）为什么诱导不出带来呢？复制子不一样，抗性不一样，菌液pcr都有带，用的PH8.0 Tris HCl 裂解菌体，BL21 condon 稀有密码子对照菌株同样结果，一个蛋白诱导出来了，想要的目的蛋白没有诱导出来，实在想不通，目前正在将两种蛋白互换标签（PS：小木虫为什么不能发picture）
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1楼 2020-12-08 22:46:34
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
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引用回帖:
10楼: Originally posted by 天下苍凉 at 2022-01-30 09:52:59
我也想问一下，我在BL21DE3中共转了pET28a和pET22b，我两个蛋白都表达了。但是，我老师说这是不可以的。因为复制子一样的情况下，质粒不能共存。可是，我在培养基中添加了两种抗生素，难道不应该可以共存吗？

之前有理论说，如果复制子一样的两个质粒在同一宿主菌内会不兼容。

但是后面也有人发文章，说同样的pET质粒，不同抗性也可以表达出蛋白（因为抗性筛选压力吧）
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11楼2022-01-30 10:56:55
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crashandburn

银虫 (正式写手)
★
更深的蓝888(金币+1): 谢谢参与
单独做都可以吗？

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6楼2020-12-15 07:23:32
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季末季末

新虫 (正式写手)
★
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共表达是需要抗性不一样么？不一样的话凃板的时候用哪个抗性呀

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7楼2020-12-23 09:40:28
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更深的蓝888

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 季末季末 at 2020-12-23 09:40:28
共表达是需要抗性不一样么？不一样的话凃板的时候用哪个抗性呀

在两个载体的抗性筛选就可以
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8楼2020-12-25 20:43:14
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汪和烤羊排

新虫 (初入文坛)
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请问你的问题解决了吗？我现在遇到了同样的问题，方便的话能不能私信一下我，我们互加一下微信讨论一下？谢谢！
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9楼2021-04-07 20:08:35
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天下苍凉

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也想问一下，我在BL21DE3中共转了pET28a和pET22b，我两个蛋白都表达了。但是，我老师说这是不可以的。因为复制子一样的情况下，质粒不能共存。可是，我在培养基中添加了两种抗生素，难道不应该可以共存吗？
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10楼2022-01-30 09:52:59
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bbrine

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我想请教一下，共同转化后涂板长菌也是16h吗，因为我试过共转化很多次，但在涂板后都没长菌
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12楼2022-02-14 15:19:15
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苏州华博2楼
2020-12-14 13:47   回复  
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miaojiabing3楼
2020-12-14 16:30   回复  
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psylhh4楼
2020-12-14 23:08   回复  
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闲得腾云去5楼
2020-12-15 04:03   回复  
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