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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » pcr电泳弥散严重，求助大神是什么原因？
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makotoichi

铜虫 (初入文坛)

[求助] pcr电泳弥散严重，求助大神是什么原因？ 已有3人参与

跑的是环境样品里提的DNA，目的条带500bp上下，体系25uL

pcr电泳弥散严重，求助大神是什么原因？


@gyesang 发自小木虫Android客户端
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1楼 2020-11-26 14:01:49
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2020-12-04 04:15:19
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Alex998

新虫 (初入文坛)
同问，楼主解决问题了吗？
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3楼2023-04-17 21:57:38
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KM石头

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Alex998 at 2023-04-17 21:57:38
同问，楼主解决问题了吗？

胶有问题，maker都没跑好，胶煮到没有颗粒，清澈透明才行
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4楼2023-04-23 16:43:03
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poody

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没有特异性带，可能是引物不够特异，重新设计引物；反应退火温度设置过低，调高退火温度；或者模板中目的序列拷贝数太低，试试多加点模板或是在采样时想办法提高浓度。
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5楼2023-05-02 16:53:40
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ffplant

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先marker都不是很清晰，大概率是胶有问题或者是染料有问题，胶要煮沸才行，染料的话可以用新配的EB试试，没有EB就用最新的染料，染料放置时间过长也会出现这种情况，环境提取的DNA可能杂质较多，有些成分抑制了PCR，导致扩的效果不太好，建议做个模板量梯度试试，也可能是你的引物本身特异性不高，可以试试做个梯度PCR或降落PCR。
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6楼2023-05-06 11:59:05
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