| 查看: 488 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
蛋白洗脱不下来
|
|||
|
经过验证，我想要纯化的蛋白是以包涵体的形式表达的，于是通过溶菌酶破壁，超声波去核酸12000rpm离心后，沉淀经过洗涤后用尿素溶解，离心取上清过NI柱，用梯度分别为100mM、200mM、300mM、500mM的咪唑洗脱（洗脱前通过调PH值，各种溶液都保证在8.0左右，并且整个体系都是用8M尿素调的），跑SDS-PAGE结果都没有发现目的条带，而最后用含有EDTA的剥离缓冲液将NI离子剥离，发现电泳结果中有清洗的目的条带，表明之前并没有将目的蛋白洗脱下来，想请问各位是不是我的咪唑浓度设计的不合适？是否有好的解决建议？ 谢谢各位了，对于大家的帮助我不胜感激！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂
已经有9人回复
-
博士推荐
已经有6人回复
-
298求调剂
已经有8人回复
-
0856材料求调剂
已经有11人回复
-
311求调剂
已经有7人回复
-
材料学调剂
已经有4人回复
-
面上模板改不了页边距吧？
已经有3人回复
-
高分子化学与物理调剂
已经有5人回复
-
版面费该交吗
已经有18人回复
-
285求调剂
已经有5人回复
mwgyanchu
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 9196.5
- 红花: 1
- 帖子: 1844
- 在线: 68.8小时
- 虫号: 684811
- 注册: 2008-12-30
- 性别: GG
- 专业: 分析化学
2楼2009-07-24 16:05:14
3楼2009-07-27 10:21:53
4楼2009-07-27 15:26:47
