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蛋白洗脱不下来
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经过验证，我想要纯化的蛋白是以包涵体的形式表达的，于是通过溶菌酶破壁，超声波去核酸12000rpm离心后，沉淀经过洗涤后用尿素溶解，离心取上清过NI柱，用梯度分别为100mM、200mM、300mM、500mM的咪唑洗脱（洗脱前通过调PH值，各种溶液都保证在8.0左右，并且整个体系都是用8M尿素调的），跑SDS-PAGE结果都没有发现目的条带，而最后用含有EDTA的剥离缓冲液将NI离子剥离，发现电泳结果中有清洗的目的条带，表明之前并没有将目的蛋白洗脱下来，想请问各位是不是我的咪唑浓度设计的不合适？是否有好的解决建议？ 谢谢各位了，对于大家的帮助我不胜感激！！ |
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