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是太阳吖

新虫 (初入文坛)

[求助] 克隆相关问题 已有1人参与

最近在建噬菌体抗体库,遇见问题如下:质粒两次酶切后,没有大片段,是切碎了吗?酶切反应是否必须要失活酶?最后要跑胶回收,可不可以直接点样?因为目的片段在质粒上,不能pcr,只能酶切质粒,所以切20ug回收效率非常低目的片段6ng/ul(20ul左右),会影响之后的连接效率吗?如果想提高连接效率有什么建议嘛?
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jie123400

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.质粒上的酶切位点有没有问题?导致切的条带大小不正确?
2.酶切产物取1-2ul检测后可以直接点回收胶。
3.回收效率低我觉得应该是试剂盒的问题,不可能20ug只回收到那么一点点。
2楼2020-11-20 17:56:40
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