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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 克隆相关问题
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是太阳吖

新虫 (初入文坛)

[求助] 克隆相关问题 已有1人参与

最近在建噬菌体抗体库，遇见问题如下：质粒两次酶切后，没有大片段，是切碎了吗？酶切反应是否必须要失活酶？最后要跑胶回收，可不可以直接点样？因为目的片段在质粒上，不能pcr，只能酶切质粒，所以切20ug回收效率非常低目的片段6ng/ul（20ul左右），会影响之后的连接效率吗？如果想提高连接效率有什么建议嘛？
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1楼 2020-11-18 18:49:16
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jie123400

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.质粒上的酶切位点有没有问题？导致切的条带大小不正确？
2.酶切产物取1-2ul检测后可以直接点回收胶。
3.回收效率低我觉得应该是试剂盒的问题，不可能20ug只回收到那么一点点。
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2楼2020-11-20 17:56:40
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