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帕戴维

新虫 (小有名气)

[求助] 抗性筛选

基因敲除,对野生型真菌做抗性筛选,用的潮霉素,几次重复后发现其耐受浓度不一致。偶尔一次做到100ug/ml还能生长,但比低浓度条件下长得差。这样的不确定结果,可能是真菌本身的问题么?另外,文献对其他真菌用到筛选浓度最高达200ug/ml,如果有必要可能会做到这个浓度。
期待大家的交流探讨!!@biostar2009
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biosci

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换诺尔丝霉素吧,真菌耐受潮霉素不稳定,

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2楼2020-10-30 11:34:23
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帕戴维

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2020-10-30 11:34:23
换诺尔丝霉素吧,真菌耐受潮霉素不稳定,

谢谢建议。只是看文献也用的挺好的,潮霉素属于氨基糖苷类应该蛮稳定的呀,倒板温度也是温热时加入抗生素的。

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3楼2020-10-30 17:04:06
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帕戴维

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2020-10-30 11:34:23
换诺尔丝霉素吧,真菌耐受潮霉素不稳定,

现在野生型太耐受了,转化后的板子都满板长,根本挑不出转化子了。

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4楼2020-10-30 17:05:26
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biosci

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就是说,酵母对潮霉素的耐受范围很大,用起来很不稳定,

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5楼2020-10-30 21:09:13
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帕戴维

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by biosci at 2020-10-30 21:09:13
就是说,酵母对潮霉素的耐受范围很大,用起来很不稳定,

好的,谢谢建议。换抗性那得重构质粒了

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6楼2020-10-30 23:07:38
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