| 查看: 4998 | 回复: 3 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者zhubin0815将赠送您 500 个金币 | ||
zhubin0815木虫 (小有名气)
|
[求助]
大肠杆菌扫描电镜观察 已有1人参与
|
|
虫友们，最近在做大肠杆菌培养与扫描电镜观察，样品准备步骤是从文献上扒的（之前无基础 ），发现得到的图片与文献中不同 ，好像有东西未洗干净的样子（见附件），所以怀疑步骤有问题，求各位大神指点迷津 ，具体步骤如下：1. 用10 μL枪头挑取菌种接种到含有20 mL的LB液体培养基中，在摇床中150 r/min 培养24 h。 2. 用接种环沾取一环的菌量，在固体培养基上进行划线分离； 3. 挑取平板上出现的单一菌落接种到含有20 mL的LB液体培养基中，在摇床中150 r/min 培养24 h。 4. 用移液枪吸取250 μL到50 mL的LB液体培养基中，在摇床中150 r/min 培养16 h。 5. 然后用PBS缓冲液洗3次，每次离心机6000转离心6分钟。 6. 取20 μL稀释后的菌液滴在洁净的边长为5 mm的硅片上； 7. 与37 ℃的烘箱内干燥至半干； 8. 将处理后的载玻片置于2.5%（体积比）的戊二醛的磷盐酸缓冲液中浸泡24小时，来对细菌进行固定； 9. 用0.1M pH7.0 PBS溶液润洗三次（每次15 min），洗去载菌玻片上的戊二醛磷酸盐缓冲液； 10. 放置在30%，50%，75%，85%和95%的乙醇梯度溶液中进行脱水处理；（30%乙醇→50%乙醇→75%乙醇→85%乙醇→95%乙醇，每一级15 min，再用100%的乙醇处理2次，每次20 min） 11. 脱水处理后的载菌玻片置于烘箱中37 ℃进行干燥处理。 12. 扫描电镜喷铂后观察。  1.jpg  2.jpg  文献照片.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
085701环境工程专硕求调剂
已经有6人回复
-
0817化学工程319求调剂
已经有10人回复
-
伙伴们，祝我生日快乐吧
已经有5人回复
-
274求调剂0856材料化工
已经有10人回复
-
337一志愿华南理工0805材料求调剂
已经有6人回复
-
（081700）化学工程与技术-298分求调剂
已经有7人回复
-
材料与化工304求B区调剂
已经有5人回复
-
NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗
已经有9人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂
已经有17人回复
-
0703化学一志愿211 总分320求调剂
已经有3人回复
caiqingchong
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2471.6
- 散金: 15
- 红花: 7
- 帖子: 1793
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 264514
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
2楼2020-11-01 21:46:17
fengya8866
至尊木虫 (知名作家)
木有钱
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 17620
- 红花: 12
- 帖子: 5566
- 在线: 110.6小时
- 虫号: 2873881
- 注册: 2013-12-16
- 性别: GG
- 专业: 能源化工
3楼2021-01-16 22:25:51
4楼2021-12-28 20:56:25
