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zhubin0815

木虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌扫描电镜观察已有1人参与

虫友们,最近在做大肠杆菌培养与扫描电镜观察,样品准备步骤是从文献上扒的(之前无基础),发现得到的图片与文献中不同,好像有东西未洗干净的样子(见附件),所以怀疑步骤有问题,求各位大神指点迷津,具体步骤如下:
        1. 用10 μL枪头挑取菌种接种到含有20 mL的LB液体培养基中,在摇床中150 r/min 培养24 h。
        2. 用接种环沾取一环的菌量,在固体培养基上进行划线分离;
        3. 挑取平板上出现的单一菌落接种到含有20 mL的LB液体培养基中,在摇床中150 r/min 培养24 h。
        4. 用移液枪吸取250 μL到50 mL的LB液体培养基中,在摇床中150 r/min 培养16 h。
        5. 然后用PBS缓冲液洗3次,每次离心机6000转离心6分钟。
        6. 取20 μL稀释后的菌液滴在洁净的边长为5 mm的硅片上;
        7. 与37 ℃的烘箱内干燥至半干;
        8. 将处理后的载玻片置于2.5%(体积比)的戊二醛的磷盐酸缓冲液中浸泡24小时,来对细菌进行固定;
        9. 用0.1M pH7.0 PBS溶液润洗三次(每次15 min),洗去载菌玻片上的戊二醛磷酸盐缓冲液;
        10. 放置在30%,50%,75%,85%和95%的乙醇梯度溶液中进行脱水处理;(30%乙醇→50%乙醇→75%乙醇→85%乙醇→95%乙醇,每一级15 min,再用100%的乙醇处理2次,每次20 min)
        11. 脱水处理后的载菌玻片置于烘箱中37 ℃进行干燥处理。
        12. 扫描电镜喷铂后观察。

大肠杆菌扫描电镜观察
1.jpg


大肠杆菌扫描电镜观察-1
2.jpg


大肠杆菌扫描电镜观察-2
文献照片.jpg
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郁郁独行者
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可以赢但

铜虫 (初入文坛)

可以用4%的多聚甲醛固定。4h就够了,不用24h。
4楼2021-12-28 20:56:25
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