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uu910109

银虫 (小有名气)

[求助] 验证提取的RNA中是否含有DNA残留-引物设计

实验介绍:
想设计引物来确定提取的RNA中是否含有DNA残留,引物5、6、7为正向引物在外显子上,反向引物在内含子上,预期想达到无论是在实验的哪个阶段(RNA、cDNA、或者文库),均能检测提取的RNA中是否含有DNA。
设计引物后进行验证:RNA、BC DNA、NTC均进行逆转录操作,然后使用设计的引物进行扩增,但是RNA的逆转录产物cDNA也扩增出了条带,且条带大小和DNA扩增的产物一致,请问各位大神问题出在了哪里呀?

验证提取的RNA中是否含有DNA残留-引物设计
微信图片_20201012174736.png
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uu910109

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by glowinthesky at 2020-10-14 16:36:57
说明你提的RNA里面有DNA残留,反转录之后仍然有残留?
你用DNase消化一下做个阴性对照试试

后续我们直接用RNA模板(没有逆转录)直接进行扩增,发现并没有明显条带,可以确定并不是DNA残留造成的,我怀疑会不会有mRNA前体的存在,决定去测一个一代看一下序列。
3楼2020-10-15 10:44:25
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glowinthesky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
uu910109: 金币+30, 博学EPI+1, 有帮助 2020-10-15 10:45:05
说明你提的RNA里面有DNA残留,反转录之后仍然有残留?
你用DNase消化一下做个阴性对照试试
2楼2020-10-14 16:36:57
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