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汕头大学海洋科学接受调剂
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uu910109

银虫 (小有名气)

[求助] 验证提取的RNA中是否含有DNA残留-引物设计

实验介绍：
想设计引物来确定提取的RNA中是否含有DNA残留，引物5、6、7为正向引物在外显子上，反向引物在内含子上，预期想达到无论是在实验的哪个阶段（RNA、cDNA、或者文库），均能检测提取的RNA中是否含有DNA。
设计引物后进行验证：RNA、BC DNA、NTC均进行逆转录操作，然后使用设计的引物进行扩增，但是RNA的逆转录产物cDNA也扩增出了条带，且条带大小和DNA扩增的产物一致，请问各位大神问题出在了哪里呀？

验证提取的RNA中是否含有DNA残留-引物设计
微信图片_20201012174736.png
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1楼 2020-10-12 18:00:07
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glowinthesky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
uu910109: 金币+30, 博学EPI+1, ★有帮助 2020-10-15 10:45:05
说明你提的RNA里面有DNA残留，反转录之后仍然有残留？
你用DNase消化一下做个阴性对照试试
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2楼2020-10-14 16:36:57
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uu910109

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by glowinthesky at 2020-10-14 16:36:57
说明你提的RNA里面有DNA残留，反转录之后仍然有残留？
你用DNase消化一下做个阴性对照试试

后续我们直接用RNA模板（没有逆转录）直接进行扩增，发现并没有明显条带，可以确定并不是DNA残留造成的，我怀疑会不会有mRNA前体的存在，决定去测一个一代看一下序列。
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3楼2020-10-15 10:44:25
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