24小时热门版块排行榜    

查看: 282  |  回复: 4
当前主题已经存档。

sgba0307

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助

有没有人做过100bp以下小片段的克隆和表达的兄弟姐妹,我已经做了好久了,一直老是出问题,好郁闷,如果有人做过的话希望能够交流一下,谢谢。
先是p不出来,后来好不容易p出来了切胶回收后跑电泳结果什么都没有,重复好几次了都一样,后来直接连T载体,转化后涂板结果长的密密的比芝麻还小的透明小菌落,挑菌后培养,菌液变浑浊了但是提质粒后双酶切没有出现目的条带,出现的结果真是郁闷啊
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主

帮顶!
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
2楼2009-07-20 21:35:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):已经木虫了,你准备冲什么啊?版主? 7-20 21:53
我做过
切胶回收的试剂盒,有些对短片段是无能为力的,直接洗掉
你要好好研究说明书,比如Promega的就有写对多少bp的片段的回收能力是多少

然后,短片段的连接非常难连,我一般选择4度过夜

提质粒之后选择菌落PCR而不要酶切
因为片段那么短,同样摩尔数,质量就非常小,因此在胶上很难观察到
即使通过观察空载体酶切也比较困难,因为切掉的太小,很难判断
3楼2009-07-20 21:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sgba0307

铁虫 (小有名气)

谢谢指导,还有什么好的经验么》?
4楼2009-07-21 10:17:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liby

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
100bp片段试着拿乙醇沉淀回收。
做菌液PCR
5楼2009-07-21 10:51:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sgba0307 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 求调剂323材料与化工 +3 1124361 2026-03-24 3/150 2026-03-24 20:24 by peike
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +3 哈哈157349 2026-03-21 3/150 2026-03-24 14:11 by zhyzzh
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 352求调剂 +3 大米饭! 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123!
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见