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kaixinbobo

铜虫 (初入文坛)

[求助] 真核转录组测序

想要做真菌的有参转录组测序,已经做了该菌基因组的de nove的二三代联用测序。但是有点不太明白,转录组测序平台使用的是二代测序平台,那基因组做三代测序有什么意义吗?
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Creek0501

铜虫 (初入文坛)

三代测序read更长,有利于assemble参考基因组

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2楼2020-09-24 16:21:12
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kaixinbobo

铜虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by Creek0501 at 2020-09-24 16:21:12
三代测序read更长,有利于assemble参考基因组

那我们做的二三代联用基因组测序,还是二代测序结果为基础,三代测序只是做了进一步的完善。是这个意思吗?我有些搞不懂用二代三代联用获得的基因组测序数据是什么含义。而且既然转录组测序是二代的,那么用这种方法是如何进行分析的?非常感谢
3楼2020-09-24 17:02:11
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Creek0501

铜虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by kaixinbobo at 2020-09-24 17:02:11
那我们做的二三代联用基因组测序,还是二代测序结果为基础,三代测序只是做了进一步的完善。是这个意思吗?我有些搞不懂用二代三代联用获得的基因组测序数据是什么含义。而且既然转录组测序是二代的,那么用这种方 ...

我觉得你的描述中涉及到两个不太相关的问题,不应该两个问题混在一起讨论。1)二代+三代基因组测序是一个问题,二三代一起测,可以更好的assemble一个参考基因组。因为二代测序很准,但由于太短(最长一般也就2*250bp左右),很难解决基因组中的重复区域的assemble。三代测序虽然错误率比较高,但测序比较长,在assemble过程中可以起到指向标的作用,帮助解决重复区域拼接的问题。2)转录组测序可以用二代或三代,但转录本一般没有那么长(三代可以到1Mb以上),且三代的错误率比较高。因此目前一般用二代测序转录组。后续分析可以用常规流程:表达量定量、差异表达基因寻找、功能富集、网络构建等。

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4楼2020-09-25 09:09:07
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kaixinbobo

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
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4楼: Originally posted by Creek0501 at 2020-09-25 09:09:07
我觉得你的描述中涉及到两个不太相关的问题,不应该两个问题混在一起讨论。1)二代+三代基因组测序是一个问题,二三代一起测,可以更好的assemble一个参考基因组。因为二代测序很准,但由于太短(最长一般也就2*25 ...

是这样,我们基因组测序用的是华大的BGI平台,但是其他公司使用的是Illumina平台。如果我们转录组想去别的公司去做,有的公司说,平台不一样,虽然可以分析,但是可能会有影响。有的公司说没有关系。所以就比较混乱。希望能指导一下。非常感谢!!!
5楼2020-09-25 15:21:20
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Creek0501

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kaixinbobo at 2020-09-25 15:21:20
是这样,我们基因组测序用的是华大的BGI平台,但是其他公司使用的是Illumina平台。如果我们转录组想去别的公司去做,有的公司说,平台不一样,虽然可以分析,但是可能会有影响。有的公司说没有关系。所以就比较混乱 ...

理论上讲不同平台测出的序列应该是一致的(本来就应该这样),但由于平台有各自的bias,所以测出的结果稍微不同。但这个不同对分析结果的影响有多大,我觉得在不同分析中可能不同,但总体可能没有那么大的影响。
此外,数据已经测了,如果不能重新测序(换成一致的平台),数据还是得分析,即不管有没有影响,你还是得做分析。
所以,我觉得先分析吧,具体的看分析结果。保持一致的平台,可能被质疑的概率小一些。
6楼2020-09-25 15:58:04
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