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SteveNash

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 请教用过PCR引物和探针的达人,现在国产的质量如何? 已有1人参与

现在国内有很多的DNA合成公司,如金斯瑞、上海生工、金唯智等。我搜到了一些前些年的评论,2010年前反馈的信息中因为引物的问题导致的PCR失败发生的事情还不少,不知道现在国产的质量水平提高了吗?因为PCR引物问题导致的实验失败事件概率怎么样?

想请教用过PCR引物和探针的达人,现在这些国产的PCR引物和探针质量水平如何,纯度和碱基缺失率都怎么样,实际交付的产品能达到国标的水准吗?国产的里面哪家质量比较好?跟进口的相比有多大差距?

另外,在收到产品后,你们会自己再做一下质检吗?如果做的话会用哪些方法?
请达人赐教!
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SteveNash

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 雨独步 at 2020-09-22 16:24:45
很早的时候用Invitrogen的引物,近些年都是用的国产,像捷瑞、泓迅等。就是常规PCR,会更考虑价格和送货速度,总体来说能够满足实验需求,偶尔会出现碱基缺失,或者简并引物偏好性太强等问题。订制引物时可以自己选 ...

感谢应助!另外还想求教一下简并引物偏好性太强是指什么问题。现在国产的引物价格一般都是多少?还有您是否用过探针,探针的质量要求跟PCR引物有不同吗?或者说在购买探针的时候有哪些方面需要注意。
3楼2020-09-23 12:00:05
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
SteveNash: 金币+50, ★★★很有帮助 2020-09-23 11:55:46
SteveNash: 金币+50, ★★★很有帮助 2020-09-24 08:48:43
很早的时候用Invitrogen的引物,近些年都是用的国产,像捷瑞、泓迅等。就是常规PCR,会更考虑价格和送货速度,总体来说能够满足实验需求,偶尔会出现碱基缺失,或者简并引物偏好性太强等问题。订制引物时可以自己选择纯化方式,当然要求越高,收费越高。我们只用最基础的纯化方式,收到产品直接就用了,没做过质检。
2楼2020-09-22 16:24:45
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by SteveNash at 2020-09-23 12:00:05
感谢应助!另外还想求教一下简并引物偏好性太强是指什么问题。现在国产的引物价格一般都是多少?还有您是否用过探针,探针的质量要求跟PCR引物有不同吗?或者说在购买探针的时候有哪些方面需要注意。...

简并引物是指引物中有N(A+T+C+G)、S(G+C)等碱基,目的是对该位点进行饱和突变,偏好性强是随机挑取单克隆测序时,多个测序结果完全相同。现在引物一般是0.4元/bp,只用最基础的纯化方式。我没有用过探针,但是探针要求的纯化方式好像比较高。具体的注意事项可以请教用过的朋友或者引物合成公司,他们可以给出一些建议。
4楼2020-09-23 17:20:59
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