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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 膜蛋白的复性

我构建了基因工程菌(大肠杆菌BL21),诱导表达目的蛋白时总是形成包涵体,温度降到16度了还是这样;所以想做一下目的蛋白的复性。但是我的目的蛋白是一个膜蛋白,不知道该怎么做,请各位虫友指点指点;或者给提些减少包涵体表达的建议……谢谢。
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

大家再给点意见啊!谢谢
4楼2009-07-20 22:51:16
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w19840308

复性难度挺大的,需要摸缓冲液等多个条件,超声上清里就一点没有目的蛋白,有的话可以多摇菌
2楼2009-07-19 19:28:55
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by w19840308 at 2009-7-19 19:28:
复性难度挺大的,需要摸缓冲液等多个条件,超声上清里就一点没有目的蛋白,有的话可以多摇菌

原来做了两次上清里多多少少有一点    可是后来就是重复不出来了   唉
3楼2009-07-19 21:19:52
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baisuilan

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以挂某些可以增溶的tag,比如MBP标签。
可以向培养基中添加葡萄糖、酒精等物质。
低温,低IPTG诱导长时间。
换菌株,例如rosetta.
5楼2009-07-20 23:53:05
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