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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 膜蛋白的复性
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 膜蛋白的复性

我构建了基因工程菌（大肠杆菌BL21），诱导表达目的蛋白时总是形成包涵体，温度降到16度了还是这样；所以想做一下目的蛋白的复性。但是我的目的蛋白是一个膜蛋白，不知道该怎么做，请各位虫友指点指点；或者给提些减少包涵体表达的建议……谢谢。
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1楼 2009-07-19 16:23:23
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w19840308

复性难度挺大的，需要摸缓冲液等多个条件，超声上清里就一点没有目的蛋白，有的话可以多摇菌
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2楼2009-07-19 19:28:55
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by w19840308 at 2009-7-19 19:28:
复性难度挺大的，需要摸缓冲液等多个条件，超声上清里就一点没有目的蛋白，有的话可以多摇菌

原来做了两次上清里多多少少有一点    可是后来就是重复不出来了   唉
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3楼2009-07-19 21:19:52
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
大家再给点意见啊！谢谢
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4楼2009-07-20 22:51:16
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baisuilan

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以挂某些可以增溶的tag,比如MBP标签。
可以向培养基中添加葡萄糖、酒精等物质。
低温，低IPTG诱导长时间。
换菌株，例如rosetta.
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-07-20 23:53:05
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by baisuilan at 2009-7-20 23:53:
可以挂某些可以增溶的tag,比如MBP标签。
可以向培养基中添加葡萄糖、酒精等物质。
低温，低IPTG诱导长时间。
换菌株，例如rosetta.

谢谢
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6楼2009-07-21 08:50:30
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ly888lsp

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
需要摸缓冲液等多个条件，超声上清里就一点没有目的蛋白，有的话可以多摇菌
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-07-21 11:05:22
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