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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

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[交流] 求分步酶切步骤

我对质粒进行双酶切，同时酶切效果一直不好。分步酶切具体步骤怎么做啊？
哪位高手指教一下！

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一个人可以不成功，但不可以不成长！

1楼 2009-07-19 15:43:24

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zhaolixia0814

金虫 (小有名气)

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这样要看酶的特性，有时可以顺序酶切，先低盐后高盐，有的酶要求高就要切完一个回收后第二个再切

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2楼2009-07-19 15:46:44

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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

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和普通双酶切差不多
只是酶切分两步中间多一个纯化过程参考核酸纯化试剂盒就可以做了

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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！

3楼2009-07-19 15:48:01

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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

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说一下具体步骤啊！没做过

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一个人可以不成功，但不可以不成长！

4楼2009-07-19 16:39:54

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小猫三两只

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★ ★
Anson1358(金币+1,VIP+0):不错，谢谢 7-19 18:35
Anson1358(金币+1,VIP+0): 7-20 13:16

两次酶切的步骤跟平时酶切的是一样的,一般第一次可用100ul体系,然后纯化,可采用酒精沉淀:加2.5倍100%酒精和1/10体积的醋酸钠,放-80度沉淀至少半小时(-20度也行,时间越长越好,可过夜).再用75%,100%酒精各洗一次,凉干后加水溶解(加水体积为第二次酶切中去除酶和buffer后剩余的量).进行第二次酶切,第二次酶切体系一般采用50ul

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5楼2009-07-19 17:41:46

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Anson1358

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楼上的介绍的比较详细，THANK YOU!

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一个人可以不成功，但不可以不成长！

6楼2009-07-19 20:47:36

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