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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求分步酶切步骤
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求分步酶切步骤

我对质粒进行双酶切，同时酶切效果一直不好。分步酶切具体步骤怎么做啊？
哪位高手指教一下！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
1楼 2009-07-19 15:43:24
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zhaolixia0814

金虫 (小有名气)
这样要看酶的特性，有时可以顺序酶切，先低盐后高盐，有的酶要求高就要切完一个回收后第二个再切
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2楼2009-07-19 15:46:44
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
和普通双酶切差不多
只是酶切分两步 中间多一个纯化过程 参考核酸纯化试剂盒就可以做了
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
3楼2009-07-19 15:48:01
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
说一下具体步骤啊！没做过
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
4楼2009-07-19 16:39:54
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★ ★
Anson1358(金币+1,VIP+0):不错，谢谢 7-19 18:35
Anson1358(金币+1,VIP+0): 7-20 13:16
两次酶切的步骤跟平时酶切的是一样的,一般第一次可用100ul体系,然后纯化,可采用酒精沉淀:加2.5倍100%酒精和1/10体积的醋酸钠,放-80度沉淀至少半小时(-20度也行,时间越长越好,可过夜).再用75%,100%酒精各洗一次,凉干后加水溶解(加水体积为第二次酶切中去除酶和buffer后剩余的量).进行第二次酶切,第二次酶切体系一般采用50ul
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5楼2009-07-19 17:41:46
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
楼上的介绍的比较详细，THANK YOU!
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
6楼2009-07-19 20:47:36
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