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fyn512045

新虫 (初入文坛)

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[交流] PCR扩增目的条带很淡，杂带也很多，目的条带和接近杂带不好分开，怎么弄啊

请教各位高手，我的兼并引物PCR扩增，目的条带很淡，非特异性杂带也很多，怎么办？目的条带和接近杂带看上去连着，不好分开，又怎么弄啊？先谢谢大家了

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-19 at 11:54 ]

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1楼 2009-07-19 10:30:28

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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引用回帖:

Originally posted by fyn512045 at 2009-7-19 10:30:
请教各位高手，我的兼并引物PCR扩增，目的条带很淡，非特异性杂带也很多，怎么办？目的条带和接近杂带看上去连着，不好分开，又怎么弄啊？先谢谢大家了

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-19 at 11:54 ]

你作的是简并PCR,产物出现多条带再正常不过了,你要回收和你目的条带大小相近的产物,克隆到TA载体上测序.你使用TD PCR试试看.

一定要想办法分开目的条带和杂带.可以通过做大板胶延长电泳时间的方法试试.