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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌发酵的问题
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ap372767129

铁虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌发酵的问题 已有1人参与

各位老师同学们好，我现在实验遇到了些麻烦。就是使用大肠杆菌BL21在25℃发酵表达一种蛋白酶（长时间发酵，要发酵液中的酶），发酵70h后发现发酵液中总是出现跟毛线团一样的聚集物，好像什么东西没溶解。重新转化感受态之后再表达依然是这种情况。但是转化其他表达载体后发酵就没有这样的现象。应该可以排除是培养基的问题和菌被污染问题，这个聚集物是酶的包涵体吗还是什么。另：测的酶活也很低，请老师不吝解答。

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1楼 2020-09-05 22:13:33
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
是分泌的出来的酶，还是胞内重组表达

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2楼2020-09-06 09:48:40
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ap372767129

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by forhighbio at 2020-09-06 09:48:40
是分泌的出来的酶，还是胞内重组表达

载体上有信号肽，分泌到细胞外

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3楼2020-09-06 12:18:19
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
建议重新转化重组菌株

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4楼2020-09-06 21:41:28
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a336688

木虫 (小有名气)

追梦

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
周期过长，蛋白部分变性，会有絮状沉淀析出。建议改变发酵工艺，摸索最佳工艺。
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5楼2020-09-07 09:16:19
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