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[交流]
NF-κB信号通路抑制剂活性筛选
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1. NF-kB信号通路介绍 NF-κB为一个转录因子蛋白家族，包括 Rel（c-Rel）、RELB、RelA/p65、NFκB1 p50/p105和NFκB2 p52/p100。这些蛋白起到二聚化转录因子的作用，可调节基因表达，并可影响到各种不同的生物学过程，包括先天和适应性免疫、炎症、应激反应、B细胞发育和淋巴器官形成。作为早期转录因子，NF-κB的激活不需要新翻译出的蛋白进行调控。因此，可以在第一时间对有害细胞的刺激做出反应。NF-κB通路可被细胞应激、炎症细胞因子、生长因子、紫外射线等激活。激活的NF-κB由胞质转运到胞核内后与特定DNA序列结合，形成DNA/NF-κB复合物，启动下游DNA序列转录并合成蛋白，进而发挥不同的生物学功能。 NF-κB信号通路在炎症,肿瘤发生,发展中起着重要作用.许多肿瘤包括血液肿瘤和实体瘤中均发现NF-κB信号通路的持续激活. NF-κB信号通路激活可上调凋亡抑制蛋白Bcl-xL,XIAP,cIAP1,cIAP2和增殖相关蛋白cyclin D1等的表达从而促进肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤细胞凋亡.由于NF-κB与肿瘤的密切关系,NF-κB抑制剂作为抗肿瘤候选药物的研究具有巨大潜力. 2. 荧光素报告基因检测系统 Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fire fly luciferase)活性的一种报告系统。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。 3. NF-kB信号通路抑制剂活性筛选 NF-kB信号通路抑制剂活性筛选实验，是以NF-kB-Luc质粒构建报告基因细胞株，当NF-KB通路被激活后，启动报告基因转录。本体系中通常用TNFa作为刺激剂诱导NF-KB通路激活，测试化合物对该通路的抑制活性。  NF-kB信号通路抑制剂.jpg |
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