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萝卜和香菜

新虫 (初入文坛)

[求助] 表达载体分析 已有1人参与

各位前辈，我想用同源敲除原理敲除效应蛋白，现在买了两个真菌表达载体，不知道多克隆位点在哪里？各位前辈谁用过这两个载体或者会分析的帮我分析一下。不胜感激。

表达载体分析
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表达载体分析-1
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1楼 2020-08-24 15:20:10
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wangyuan0929

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
萝卜和香菜: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-08-25 16:17:09
pCB1532H-RFP这个的多克隆位点看上去有两个——
4460~4470这一段，有5个酶切位点，2个PCR引物识别序列，附近还有启动子
716~744这一段，有5个酶切位点，2个PCR引物识别序列，附近也有启动子

pAN7-1这个质粒我没太看懂
可能是用潮霉素抗性基因（HPH）中间的位点进行连接？然后靠抗性筛选来找到阳性克隆吗？
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2楼2020-08-25 09:05:29
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萝卜和香菜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-25 09:05:29
pCB1532H-RFP这个的多克隆位点看上去有两个——
4460~4470这一段，有5个酶切位点，2个PCR引物识别序列，附近还有启动子
716~744这一段，有5个酶切位点，2个PCR引物识别序列，附近也有启动子

pAN7-1这个质粒我没 ...

Pan7-1这个载体我想从BamHI这个酶切位点把他切开，然后连上去，会影响他的功能吗？
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3楼2020-08-25 16:21:19
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wangyuan0929

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 萝卜和香菜 at 2020-08-25 16:21:19
Pan7-1这个载体我想从BamHI这个酶切位点把他切开，然后连上去，会影响他的功能吗？...

看上去可能不会，但是我怀疑设计这个质粒的时候，目的就是靠HPH基因的插入（插入外源序列）来鉴定阳性克隆的
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萝卜和香菜
4楼2020-08-25 16:27:34
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萝卜和香菜

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangyuan0929 at 2020-08-25 16:27:34
看上去可能不会，但是我怀疑设计这个质粒的时候，目的就是靠HPH基因的插入（插入外源序列）来鉴定阳性克隆的...

是的，这个我当时查的时候，大家都是用HPH基因筛阳性转化子的。非常感谢
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5楼2020-08-25 16:52:28
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