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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » pET质粒
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2339773049

新虫 (小有名气)

[求助] pET质粒 已有2人参与

请教一下

有两个pET32a+重组质粒，其中一个人为更换抗生素标签，这两个质粒在大肠中可以共存吗？容易丢失吗？

谢谢
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1楼 2020-08-14 17:10:12
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donkey2014

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2339773049: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2020-08-16 09:55:15
不可以，不同复制子的可以共存
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2楼2020-08-15 10:07:17
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
2339773049: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2020-08-16 09:55:43
这样是不行的，如果要同时表达两个蛋白，试一下Duet系列有两个MCS的质粒吧！
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3楼2020-08-15 19:52:12
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白话八股

金虫 (正式写手)
理论上不同复制子才可以共存，但是实际使用中只要抗性不同，完全可以共存，容易丢失？一直施加抗生素压力，及时活化还是可以保证的。
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最爱的那个人会出现在身边。
4楼2020-08-19 15:00:09
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zsygxh

金虫 (小有名气)
理论上不同复制子可以共存，实际以不同抗性施压也可以正常表达，我以前实验室有人经常这么干。但凡有一个质粒丢失，就失去了相应抗性，细菌就会死亡，所以保证抗生素够量就能保证含双质粒菌体一直扩增下去并表达蛋白。需要注意的是，如果是发酵罐高密度表达，Amp等β-内酰胺类抗生素会被逐渐消耗，相同复制子的质粒在细菌扩增传代过程中就可能会出现逐渐丢失的情况，所以不宜使用，可以使用其它抗性代替。摇瓶低密度表达不存在这个问题。

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5楼2020-08-20 14:10:01
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